马 林，罗家权，李 丹，张 康，张玉敏，裴秀丛，段志文，马明月

0 引言

双酚A(Bisphenol A，BPA)是一种环境内分泌干扰物，其作为增塑剂广泛应用于水瓶、塑料袋、食品包装袋等生活用品中。据统计，每年BPA的产量在390万吨左右[1]。研究显示，BPA存在于水体、土壤、空气及生物体内[2]。由于BPA的化学结构与雌激素类似，也被称为类雌激素样物质，因此，BPA对动物胚胎发育、生殖系统的损伤作用被广泛关注。

实时无标记细胞状态分析系统(Real-time cell analysis,RTCA)是一种通过专用接种板下微金电子传感器芯片，当贴壁生长在微电极表面的细胞引起电极界面阻抗的改变时，该阻抗值的变化直接反映细胞的生物学状态。因此，RTCA在细胞生理状态下可以实时、连续、定量跟踪细胞形态和增殖分化改变，为细胞水平的分析研究提供了一个实时动态信息获取的独特方法[3-4]。本文结合RTCA iCELLigence系统与台盼蓝染色法对BPA引起的小鼠睾丸间质细胞(TM3)的细胞毒性进行监测，通过对比研究细胞毒性的最佳实验手段。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 小鼠睾丸间质细胞(TM3)购自中国科学院细胞库。

1.1.2 仪器和试剂 CO2培养箱(美国Thermo公司)、超净工作台(中国东联哈尔仪器制造有限公司)、倒置显微镜(中国北京新惠泽奥科技有限公司)、台式离心机(美国Thermo公司)、RTCA iCELLigence(中国艾森生物有限公司)、Vi-cell细胞活力计数仪(美国贝克曼库尔克有限公司)。BPA(纯度：99%，美国Sigma公司)；DMEM-F12培养液(美国Hyclone公司)；胎牛血清(美国Biochrom)；青霉素-链霉素(美国Biological Iudustries公司)；二甲基亚砜(DMSO,美国Sigma公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠TM3细胞培养 TM3细胞培养于10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的DMEM-F12培养基中，于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，待细胞铺满T25瓶底80%左右进行传代，传至第3代后开展后续实验。……