崔桂玉 白剑 苗兰英 林大勇 刘鸿

1内蒙古民族大学医学院（内蒙古通辽028000）；2辽宁中医药大学（沈阳 110847）

胎盘间充质干细胞是成体干细胞的一种，由于其具有低免疫原性、来源广泛和免疫抑制的特点，目前已经应用于临床治疗缺血性疾病和预防移植物抗宿主病等［1-2]。由于体内免疫系统存在使得外源性输入的胎盘间充质干细胞很快的被淋巴细胞识别、杀伤，这些因素直接导致胎盘间充质干细胞在体内存活的时间和数量减少［3]。人类白细胞抗原-G（human leucocyte antigen-G，HLA-G）属于非经典的HLAⅠ类分子，在孕妇体内表达较高，其主要功能是诱导母婴耐受，近年来的研究表明HLA-G对于自然杀伤淋巴细胞（natural killer lymphocyte，NK）、CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞具有抑制作用［4-5]。HLA-G可以直接与NK与KIR2DL4受体相互作用，阻断MAPK和DNA-PKcs信号通路，抑制NK杀伤活性［6]。胎盘间充质干细胞能够表达HLA-G，孕酮可以调节HLA-G表达强度，在一定程度上增强胎盘间充质干细胞的免疫抑制功能，但是HLA-G表达与孕酮的浓度呈现计量依赖性，当孕酮消失后HLA-G表也随之降低并逐步消失［4，7]。外源性的转染 HLA-G 基因可以持续的表达该蛋白，有效的增强胎盘间充质干细胞的免疫抑制功能，将HLA-G阳性的胎盘间充质干细胞与NK细胞混合培养，检测NK细胞对HLA-G阳性的胎盘间充质干细胞杀伤作用。

1 材料与方法

1.1 材料NK92mi细胞株和NK92mi培养基（北京鼎国昌盛生物科技有限公司）；DMEM/DF12培养基和PBS（美国Gibco公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）；CytoTox 96®Non-Radioactive Cytotoxicity Assay（普洛麦格北京生物技术有限公司）；单克隆抗体CD45-Percp/CD34-PE/HLA-DR-FITC/CD29-PE/CD44-FITC/CD105-APC（美国BD公司）；PEGFP-N1-HLA-G全基因合成质粒（北京奥科鼎盛生物科技有限公司）；……