许银辉 赖麒 张小影 陈强 唐亮 刘栋 杜振宗

桂林医学院第二附属医院胸心外科（广西桂林 541199）

DNA甲基化是表观遗传学的核心组成部分，DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）是细胞生长过程中的重要组成酶之一，与肿瘤生长、转移及凋亡密切相关［1]。5-氮杂胞（5-Aza-dC）是一种DNA甲基转移酶抑制剂，在口腔癌、结肠癌、宫颈癌等［2-4]的表观治疗中可使p16、MGMT和PTEN等抑癌基因高甲基化逆转而得以正常表达。RASSFA基因在正常肺细胞中有表达，在肺癌细胞株中存在高甲基化率，将该基因去甲基化的A549细胞株接种于裸鼠后其肿瘤生长明显缩小［5]；APC基因蛋白调节β-catenin蛋白胞质内降解，是Wnt信号通路的组成部分，其失活后能激活cmyc、CyclinD1等成瘤基因［6]。然而，有关5-Aza-dC治疗后，DNMT1、RASSF1A和APC基因甲基化在肺癌细胞株中的改变情况报道尚少。基于此，本研究选取临床标本验证DNMT1在体内的表达，并运用非小细胞肺癌细胞株A549、H358和正常肺上皮细胞株BEAS-2B，通过5-氮杂胞处理后，观察其生长、侵袭和凋亡的变化，检测RASSFA、APC和DNMT1基因的转录和表达，来进一步探讨3种基因改变特点。

1 材料与方法

1.1 材料细胞株A549、H358、BEAS-2B购于南京科佰生物科技有限公司（上海）；达尔伯克改良伊格尔培养基（DMEM）、10%胎牛血清购于美国强生公司，Hoechst 33342、5-氮杂胞苷采自美国Sigma-Aldrich公司；抗DNMT1、RASSFA，、APC和GAPDH抗体购买于赛信通（上海）生物试剂有限公司；AmpliTaq Gold®购自北京泰泽瑞达科技有限公司；TBST、PBS试剂购自北京索莱宝科技有限公司；Transwell小室购买于康宁（中国）有限公司；荧光显微镜（奥林巴斯IX71，日本奥林巴斯公司）；流式细胞仪购买于美国BD公司；RT-PCR试剂盒购买于北京嘉美纽诺生物科技有限公司。……