宋利捷，张 楠，李兴月，孙紫薇，翁丽丽*

（1.吉林省中医药科学院，长春 130021；2.长春中医药大学，长春 130117）

龙胆科（Gentianaceae）植物在我国广泛分布，且很多种类具有重要的药用价值，药用资源开发潜力巨大。龙胆属（Gentiana）包含了龙胆科大部分的药用植物[1]。《中国药典》2015版记载中药龙胆的原植物为龙胆科植物条叶龙胆（Gentiana manshuric kitag.）、 龙 胆（Gentiana scabra Bge.）、三花龙胆（Gentiana triflora pall.）或坚龙胆（Gentiana rigesceras Franch.）的干燥根和根茎。前三种习称“龙胆”，后一种习称“坚龙胆”[2]。朝鲜龙胆（Gentiana uchiyamai Nakai）为龙胆科植物，又称金刚龙胆或斑花龙胆[3]。朝鲜龙胆为龙胆同属植物，在东北地区具有一定的分布量，其有效化学成分的含量较高，可作为龙胆的新资源开发利用。龙胆为一些中成药的主要原料之一，直接关系到多个品种中成药产品的生存与发展。市场需求量较大，由于长期掠夺式的采挖，缺乏保护，资源日渐减少。随着对中药认识的不断发展，重金属是目前公认的对人体有害的微量元素，中药中重金属的含量是确保中药“安全、有效、可控”的首要问题之一[4]。中药材的质量一直是国家、社会重视关心的问题，近年来对重金属超标的问题尤其重视[5]。重金属可通过呼吸道、消化道和皮肤接触等多种途径进入人体，长期积蓄难以排出，从而影响细胞的正常代谢，对人体的皮肤、造血功能、循环系统、消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、神经系统均具有损伤作用，此外还会引发基因突变从而具有遗传毒性和致癌作用[6-9]。中药中重金属已成为国内外关注的焦点问题，对中药进行重金属控制十分必要[10-12]。龙胆中重金属含量的研究尚未见报道。为综合评价龙胆药材质量，笔者收集了吉林省9个不同产地的龙胆药材及2个不同产地的朝鲜龙胆药材。以微波消解-原子荧光/石墨炉原子吸收法测定药材中Hg、Pb的含量，为龙胆药材的重金属控制提供参考依据，以便更好的利用龙胆资源。

1 材料与仪器

1.1 药材 见表1。

表1 龙胆不同来源材料

1.2 试剂 1 mg/mL铅标准溶液，天津市光复精细化工研究所；1 mg/mL汞标准溶液,国家有色金属及电子材料分析测试中心；盐酸、硝酸、氢氟酸均为优级纯，购于北京化工厂；硼氢化钠购于国药集团；氢氧化钠购于天津光复；超纯水；高纯氩气（纯度99.9%）。

1.3 仪器 JA2603B电子天平（d = 0.0001 g），上海天美天平仪器有限公司产品；Water Purifier实验室专用超纯水机；ICES-001微波消解仪，Anton Paar产品；BHW-09A16电热板，上海博通化学科技有限公司产品；PF52原子荧光分光光度计、AS4自动进样器，北京普析通用仪器有限责任公司产品；AA-6880F/AAC原子吸收分光光度计、GFA-6880石墨炉原子化器、ASS-6880自动进样器、206-50587石墨管，岛津仪器（苏州）有限公司产品。

2 实验方法

2.1 汞元素的测定

2.1.1 原子荧光分光光度计工作条件 仪器条件：光电倍增管负高压 280 V；原子化器高度：10 mm；灯电流：40 mA；石墨炉温度：100℃；点火方式：不点火；载气流量：300 mL/min；屏蔽气流量：600 mL/min。测量条件：读数时间：18 s；延迟时间：4 s；2次重复；读数方式：峰面积；测量方法：标准曲线法；进样体积：1 mL。实验所需辅助条件：载液：4% HCL溶液；还原剂：0.1%硼氢化钠＋0.3%氢氧化钠溶液；清洗液：纯化水；载气：高纯氩气。

2.1.2 汞标准溶液的制备 取1 mg/mL的标准溶液，用5% HNO3溶液稀释至1 μg/mL，再用4% HCL溶液稀释至1 ng/mL。备用。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密称取样品约0.3 g，置于聚四氟乙烯（PTFE）消解罐内，加硝酸8 mL，氢氟酸2 mL，混匀，浸泡过夜。盖好内盖，按照要求旋紧外盖。次日按照标定顺序放入工程塑料外套中，置于微波消解室内，执行消解程序（详见表2）。消解完毕，反应体系自动冷却至60℃，将消解罐转移到智能控温加热器上，130℃加热至溶液体积约1 mL时取出，冷却至室温。将剩余液体转移至25 mL容量瓶中，去离子水定容，既得供试品溶液。同法制备空白。

表2 微波消解程序

2.1.4 分析方法 11批样品参照“2.1.3”项下的方法处理后，样品中Hg元素含量用冷原子分光光度法（不点火）测定，具体测量参数见“2.1.1”。

2.1.5 Hg元素标准曲线的制备 取“2.1.2”项下的标准溶液，配置1 ng/mL的Hg标准溶液，标准溶液浓度自稀释为设置的浓度值，分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 ng/mL。以浓度为横坐标，荧光值为纵坐标绘制标准曲线：Y = 3195.7094 X+35.0850（r = 0.999 13），线性关系良好。

2.1.6 检出限检查 对同法同时制备试剂的空白溶液连续测定10次,求出溶液吸收值的标准偏差；根据国际纯化学与应用化学联盟（IUPAC）中光谱学的检出限即为3倍标准偏差除以标准曲线斜率。汞的LOD 值为0.009 6 ng/mL。

2.1.7 精密度试验 取上述各对照品溶液测定含量，连续进样6次，RSD值为0.66%（n = 6）。

2.1.8 稳定性试验 取同批次样品，按样品中各元素方法进行测定。分别在0、30、60、90、120、150、180 min时测定。RSD值为1.34%（n = 6），表明样品在3 h内较稳定。

2.1.9 重复性试验 平行制备6份同批次样品，按样品中各元素方法进行测定。结果表明，Hg元素的平均含量为18.3 ng/g；RSD值为1.73%（n = 6）。

2.1.10 加样回收率 取同批次样品约0.3 g，平行制备6份。精密加入汞标准溶液适量，按样品中各元素方法进行测定。计算回收率。平均回收率为103.94%。RSD值为1.81%。详见表3。

表3 Hg元素回收率试验结果

2.2 铅元素的测定

2.2.1 石墨炉原子吸收分光光度计工作条件 测量及仪器条件：波长：283.36 nm；狭缝宽：0.7 nm；灯电流：6 mA；进样量：20 μL；程序升温：60～250℃，干燥时间：33 s；灰化温度：500℃，时间：23 s；原子化温度：2 000℃，时间：3 s；净化温度：2 500℃，时间：2 s。读数方式：峰面积。实验所需辅助条件：载气：高纯氩气；超纯水。

2.2.2 Pb标准溶液的制备 取1 mg/mL的标准溶液，用2% HNO3溶液逐级稀释至100 ng/mL，备用。

2.2.3 供试品溶液的制备 同“2.1.3”项下供试品溶液的制备。

2.2.4 分析方法 11批样品参照“2.2.3”项下的方法处理后，样品中Pb元素含量用石墨炉原子吸收分光光度法测定，具体参数见“2.2.1”。

2.2.5 Pb元素标准曲线的制备 取“2.2.2”项下的标准溶液，配置成不同浓度的Pb标准溶液，分别为10、20、30、40、50、60 ng/mL。以浓度为横坐标，吸收值为纵坐标绘制标准曲线：Y = 0.007 8 X- 0.005 1（r =0.998 9），线性关系良好。

2.2.6 检出限检查 对同法同时制备试剂的空白溶液连续测定10次，求出溶液吸收值的标准偏差；根据国际纯化学与应用化学联盟（IUPAC）中光谱学的检出限即为3倍标准偏差除以标准曲线斜率。铅的LOD 值为0.116 4 ng/mL。

2.2.7 精密度试验 取上述各对照品溶液测定含量，连续进样6次，RSD值为0.62%（n = 6）。

2.2.8 稳定性试验 取同批次样品，按样品中各元素方法进行测定。分别在0、30、60、90、120、150、180 min时测定。RSD值为1.75%（n = 6），表明样品在3 h内较稳定。

2.2.9 重复性试验 平行制备6份同批次样品，按样品中各元素方法进行测定。结果表明，Pb元素的平均含量为190.87 ng/g。RSD值为1.33%（n = 6）。

2.2.10 加样回收率 取同批次样品约0.3 g，平行制备6份。精密加入铅标准溶液适量，按样品中各元素方法进行测定。计算回收率。平均回收率为101.22%。RSD值为1.07%。详见表4。

3 实验结果

样品处理后，按照仪器工作条件分别测定不同产地龙胆中Hg、Pb的荧光值和吸收值，并计算含量。结果见表5。

表4 Pb元素回收率试验结果

4 讨论

依据《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》对重金属的限量指标：Pb≤5.0 mg/kg（5 000 ng/g），Hg≤0.2 mg/kg（200 ng/g）龙胆药材中重金属量远远低于《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》，符合标准规定。

表5 不同产地龙胆中重金属含量

检测结果初步表明，不同产地的9批龙胆药材和2批朝鲜龙胆药材，其重金属含量存在一定的差异。产地在天岗镇、九台区及龙潭区缸窑镇的样品汞含量要高于其它产地；产地在江密峰镇和七星百草园的龙胆样品、白山市的朝鲜龙胆样品铅含量要高于其它产地。结果是否具有普遍意义，值得进一步跟踪研究。应进一步结合相对应的产地土壤中重金属含量的分析结果，阐明龙胆药材是否对铅、汞有富集作用，以便进一步对龙胆中重金属含量进行有效控制，保证临床用药安全、有效。

中药材重金属污染与地质背景、药材品种及生长环境等多方面因素有关。中药材重金属的来源一方面与其生长的环境条件如土壤、大气、水、三业三废和化肥农药的施用有关[16-17]；另一方面与植物本身的遗传特性，主动吸收功能和对重金属元素的富集有关[18]。因此，从源头遏制重金属超标将是一项长期而艰巨的任务。必须加强中药材中有害重金属的检测及控制，为中药材的来源及质量控制提供一定的理论依据[19-20]。