李森辉 董鹏鹏 戴卫波 梅全喜

【摘 要】 采用香草醛-冰醋酸-高氯酸显色法考察广西6个不同产地走马胎总三萜的含量。结果表明，6个不同地区走马胎中总三萜含量为23.1～23.6mg/g，组间含量之间差异无统计学意义。该法操作简单、准确、重复性好，可为走马胎质量评价提供参考。

【关键词】 走马胎；三萜；香草醛-冰醋酸-高氯酸显色法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）01-0033-04

Abstract：The content of total triterpenoid of Ardisia gigantifoli from six different origins in Guangxi province by Vanillin-glacial acetic acid-perchloric acid colorimetric method were determined.The results showed that the average contents of total triterpenoid of Ardisia gigantifoli from three different origins were between 23.1～23.6mg/g， and there were no significant difference among them.The method is simple， accurate and reproducible， which can provide reference for evaluating the quality of Ardisia gigantifoli in different origins.

Keywords：Ardisia gigantifolia stapf.；Triterpenoid；Vanillin-glacial Acetic Acid-perchloric Acid Colorimetric Method

走马胎为紫金牛科植物大叶紫金牛Ardisia gigantifolia stapf.的干燥根，在《广西中药材标准》、《广东省中药材标准》有收载，具有祛风除湿、活血化瘀的功效，临床用于跌打损伤、风湿痹痛等治疗[1]。研究表明，从走马胎中分离得到的近20个三萜皂苷类成分[2-3]，结构多以齐墩果烷型为主，并对Hela、NCI-H460、SF-268、MCF-7、HepG2、CNE、MCF-7等多种肿瘤均具有较强的抑制作用[4-8]，表现出良好的抗肿瘤活性。课题前期研究也表明，走马胎醇提物能改善佐剂性关节炎大鼠关节肿胀和关节组织病理变化[9]，并能下调血清炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达[10]，对类风湿性关节炎有一定治疗作用。三萜类成分是走马胎的药效物质群，有必要对该类成分含量进行测定。笔者测定广西6个地区走马胎中总三萜的含量，并进行方法学考察，为走马胎质量评价提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 BS224S万分之一电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；UV-2550紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；JP-300A-8高速多功能粉碎机（永康市久品工贸有限公司）；DK-8D电热恒温三孔水槽（上海跃进医疗器械有限公司）。

1.2 材料 走马胎（采自广西玉林、桂平、桂林、百色）经过广东药科大学田素英教授鉴定为走马胎Ardisia gigantifolia Stapf.的根，详见表1。齐墩果酸对照品（批号：MUST-16042708，成都曼思特生物科技有限公司）；其他乙醇、冰醋酸、高氯酸、香草醛等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备 取各个产地走马胎药材粗粉1g，精密称定，置于100mL具塞锥形瓶中，加70%乙醇按料液比1∶[KG-*3/5]20于85℃回流提取1h，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，过滤，滤液转移至50mL容量瓶，70%乙醇定容，摇匀即得。

2.2 对照品溶液的制备 取齐墩果酸对照品约2mg，精密称定，加甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，摇匀，即得浓度为200.0μg/mL的齐墩果酸对照品溶液。

2.3 检测波长的确定 分别精密吸取供试品、对照品溶液0.2mL，置于10mL具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混匀，密塞，于60℃水浴中加热15min，取出，冰水浴2min，加入冰醋酸5mL，混匀，静置1h，用紫外-可见分光光度计在800～200nm进行全波段扫描，结果供试品及对照品均在540nm处有最大吸收，因此确定检测波长为540nm。

2.4 标准曲线的建立 精密吸取齐墩果酸对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mL，按照“2.3”项下显色后于紫外-可见分光光度计测定吸光度，其中0mL对照品作为空白对照。结果见表2。

以齐墩果酸对照品浓度（C，μg/mL）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程为：A=0.0654C-0.1114，R2=0.9995，样品的浓度在3.333～16.667μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度考察 精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.2mL，按照“2.3”项下方法顯色后于紫外-可见分光光度计测定吸光度，连续测定6次。结果齐墩果酸对照品吸光度的RSD为0.84%，说明仪器精密度良好。

2.5.2 稳定性考察 取同一批走马胎药材粗粉约1g，精密称定，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.3”项下方法显色后于0～130min内每隔10min测定吸光度。结果走马胎供试品显色后在60～120min内吸光度的RSD为2.62%，说明供试品显色后在60～120min内保持稳定，因此，测定吸光度的时间为显色后的1h。结果见表3。

2.5.3 重复性考察 取同一批走马胎药材粗粉约1g，精密称定，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，按照“2.3”项下方法显色1h后测定吸光度，计算总三萜含量。结果走马胎总三萜含量的RSD为1.43%，说明此方法重复性良好。

2.5.4 加样回收率试验 取同一批已知总三萜含量的走马胎药材粗粉约0.5g，精密称定，加入和走马胎药材中总三萜含量相当的齐墩果酸对照品溶液，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，按照“2.3”项下方法显色1h后测定吸光度，计算加样回收率。结果齐墩果酸的平均加样回收率为97.64%，加样回收率的RSD为1.29%，说明此方法测定结果准确可靠。结果见表4。

2.6 含量测定 取6份走马胎药材粗粉各约1g，精密称定，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.3”项下方法显色1h后测定吸光度，计算总三萜含量。表明总三萜含量在2.31%～2.36%，即含量在23.1～23.6mg/g，平均含量为23.33mg/g，组间含量差异很小。结果见表5。

3 讨论

走马胎在苗、瑶、黎族等少数民族均做药用，在两广地区均有分布，目前广西已有规范栽培，市售走马胎多为广西产。在两广省标中均有收载，但所载用药部位略有不同，广西省标1990年版用药部位为走马胎的根及根茎[11]，广东省标2004年版用药部位为走马胎根[1]，功效与用法用量基本相同，均载为祛风湿、活性化瘀的功效。本草考证发现，《本草纲目拾遗》最早载走马胎产于“粤东龙门县南困山”，即今广东惠州南昆山，书中未有药用部位的明确描述，仅有外形描述为“形如柴根”，而在1970年版的《龙门民间草药》中明确记载了走马胎“用根冲酒服治疗风湿痹痛，舒筋活络”，表明走马胎的根入药更符合传统的用药习惯[12]。而广西载走马胎根茎入药，可能从走马胎药源匮乏，为充分利用该药用资源而增加药用部位。本课题为了切合传统用药习惯，对广西桂林、玉林、桂平、百色4区采挖和购买了6批次走马胎，并对走马胎根中主要药效成分总三萜的含量进行测定，考察其质量。实验以齐墩果酸为对照品，建立走马胎药材中总三萜的含量测定方法，建立的标准曲线在3.333～16.667μg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系（R2=0.9997），精密度、60～120min内稳定性、重复性的RSD分别为0.84%、2.62%、1.43%，平均加样回收率为97.64%，加样回收率的RSD为1.29%，均符合要求，可为走马胎药材的质量控制提供参考。而测定广西6个不同地区的走马胎总三萜含量在23.1～23.6mg/g，该6个产地的走马胎总三萜含量差异较小，平均含量为23.33mg/g，质量相当。

参考文献

[1]广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准[S].广州：广东科技出版社，2004：101-104.

[2]张晓明. 走马胎（Ardisia gigantifolia Stapf）活性成分的研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2004.

[3]封聚强，黄志雄，穆丽华，等.走马胎化学成分研究[J].中国中药杂志，2011，36（24）：3463-3466.

[4]谷永杰. 走马胎中三萜皂苷成分H1对6株肿瘤细胞增殖及对A549肺癌细胞凋亡及细胞周期的影响[J]. 中国实验方劑学杂志，2014，20（10）：130-133.

[5]郑小丽，董宪喆，穆丽华，等.走马胎中皂苷成分AG4对MCF-7肿瘤细胞增殖的影响及机制研究[J]. 中国药理学通报，2013，29（5）：674-679.

[6]穆丽华，赵海霞，龚强强，等. 走马胎中的三萜皂苷类成分及其体外抗肿瘤活性研究[J]. 解放军药学学报，2011，27（1）：1-6.

[7]陈超，孙艳，董宪喆，等. 走马胎中化合物AG4对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的影响[J]. 中国药物应用与监测，2015，12（1）：12-15.

[8]Dong XZ， Xie TT， Zhou XJ，et al. AG4，a compound isolated from Radix Ardisiae Gigantifoliae， induces apoptosis in human nasopharyngeal cancer CNE cells through intrinsic and extrinsic apoptosis pathways[J]. Anti-Cancer Drugs，2015，26（3）：331-342.

[9]戴卫波，吴凤荣，董鹏鹏，等.走马胎对类风湿性关节炎模型大鼠踝关节组织病理学的影响[J].中药材，2017，40（5）：1205-1209.

[10]戴卫波，吴凤荣，董鹏鹏，等.走马胎醇提物对佐剂关节炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β的影响研究[J].天然产物研究与开发，2017，29（6）：502-506.

[11]广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准（1990年版）[S].南宁：广西科学技术出版社，1992：62.

[12]戴卫波，董鹏鹏，梅全喜.走马胎及其混淆品的本草考证[J].中药材，2017，40（9）：238-241.

（收稿日期：2017-11-15 编辑：穆丽华）