张 蓓，赵丽娜，韩清珍，毛菊珍，张有涛，张险峰，何 军，徐 杰，史进方

(苏州大学附属第一医院临床检测中心，江苏苏州 215006)

近年来，经验性广谱抗菌药物的使用和侵入性诊疗等危险因素的增多，使血流感染日益成为患者院内致残和致死的主要病因[1-2]。充分利用先进的微生物鉴定仪以缩短血流感染鉴定时间，指导临床及时开展病原菌针对性治疗使患者预后良好具有重要意义[3-6]。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)因能准确、快速地检测血培养中病原菌而在微生物实验室广泛使用[7-9]。与传统鉴定方法比较，直接鉴定阳性血培养有利于败血症患者得到更早、更有效的治疗[10-13]。本研究采用皂素处理阳性血培养液，使病原菌富集并纯化，然后利用MALDI-TOF MS对病原菌蛋白谱图进行鉴定分析，同时报道阳性的血培养瓶进行传统培养流程，培养的纯菌落也使用MALDI-TOF MS进行鉴定，若两者结果不一致，以后者为准。

1 材料与方法

1.1一般材料 收集2016年11月至2017年1月苏州大学附属第一医院240例血培养仪器报警患者(388例阳性仪器报警血培养瓶)标本，标本类型包括全血、静脉导管血。

1.2仪器与试剂 Bact/ALERT®3D 全自动血培养仪及其配套的血培养需氧微生物培养瓶(SA)和厌氧兼性厌氧微生物培养瓶(SN)均购自梅里埃(中国)公司。 48孔靶板和α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)(α-氰基-4-羟基肉桂酸)基质液购自梅里埃(中国)公司。皂素、甲酸和乙腈购自美国Sigma-Aldrich公司。质控校准菌株ATCC 8739由梅里埃(中国)公司提供。

1.3皂素提取法MALDI-TOF MS直接鉴定 生物安全柜内操作，采用2 mL无菌注射器提取800 μL仪器报警血培养液于含500 μL 4%皂素的1.5 mL离心管中颠倒混匀，室温放置3～5 min；……