曾琼兰 吴 利 李水明 王 勇*

1(深圳大学生命科学学院，深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室，深圳518060)2(深圳大学生命科学学院，深圳市微生物基因工程重点实验室，深圳518060)

1 引 言

外泌体是一种直径为30～100 nm的脂质包裹体结构，在透射电子显微镜下呈现杯状[1]，存在于血液、尿液和唾液等多种体液中[2]，包含DNA片段、蛋白质、mRNA和microRNA等物质[3]。越来越多的证据表明，宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移，可以作为生物指标进行研究[4～6]。Rabinowits等[7]基于全基因组表达检测，提出外泌体miRNA可以作为肺癌的诊断标记之一。另外，有研究者认为外泌体功能包括细胞信号传导、移除不需要的蛋白质以及细胞间病原体的转移，利用这一途径的一种病原体是朊病毒，它是一种传染性颗粒，负责传染性神经退行性疾病[8]。Street等[9]在人脑脊液中鉴定到外泌体，并且认为其可能是一些脑神经失调疾病扩散发展的病因，例如阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)。

唾液外泌体的分离方式包括超高速离心法[10]、密度梯度离心法[11]、凝胶过滤法[12,13]、免疫亲和捕获法[14]和基于聚合物的沉淀方法[15]等。其中凝胶过滤、密度梯度离心法耗时长，过程繁琐; 免疫亲和捕获法由于有些标记还未知，会导致外泌体产量较低; Zlotogorski-Hurvitz等[15]发现超高速离心(Ultracentrifugation，UC)和唾液外泌体试剂盒(ExoQuick，EQ)方法均能够有效分离唾液外泌体。

外泌体分析目前多采用酶联免疫吸附(ELISA)方法，而采用蛋白质组学方法分析的报道较少[14,16,17]，Gonazale-Begne等较早开展了唾液外泌体蛋白质的质谱分析工作[10,13]，但所使用的唾液体积分别为30、35 mL，样品需求量大，在临床上难以实现。……