祝帅，朱凤蒙，雍道敬

（青岛中达农业科技有限公司，山东青岛266109）

苹果树腐烂病俗称臭皮病、烂皮病、串皮病，是一种为害极其严重的毁灭性病害，在我国各苹果产区都有不同程度的发生，主要危害主枝主干，导致死枝死树，严重时导致毁园，造成巨大的经济损失，制约了我国苹果产业的持续性发展[1-3]。2011年，王彩霞等[4]调查表明山东烟台苹果产区腐烂病不但发生严重且发病持续时间长，5月份调查时，枝条上仍有大量新发生而未经刮治的病斑。而目前尚未发现有效抗腐烂病的栽培品种[5，6]，国内有关苹果树腐烂病的防治主要集中于药剂方法[7]。为了筛选出防治苹果树腐烂病的高效杀菌剂，在室内进行了几种杀菌剂对苹果树腐烂病菌的药效测定，并进行田间药效试验，以期为腐烂病的防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试菌株：苹果树腐烂病菌强致病力菌株LXS080301，采集自山东栖霞富士苹果园。单菌丝分离后进行致病力测定，保存于5℃冰箱，病原菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上活化后用于室内抑菌作用测定。田间持效期试验使用分生孢子悬浮液，将活化的菌丝接种到大麦粒培养基中，黑光灯下诱导产孢[8]。挑取分生孢子角，加入适量无菌水，混匀，用血球计数板将孢子悬浮液浓度调至1×104个/mL，加入终浓度为0.1%的吐温-20，备用。孢子悬浮液现配现用，放置时间不超过1h。

供试果树：苹果树腐烂病田间药效试验在胶州果园进行，试验用树为4年生富士苹果树，果树在进行药效试验前5个月内没有使用过任何杀菌剂。

表1 供试原药信息Table 1 Information of the test original medicine

供试药剂：市售成品杀菌剂均通过加工形成相应剂型，其中含多种助剂，为消除助剂对试验的干扰，本试验采用农药原药配制母液的方法，以期能够真实的反应杀菌剂的性能[9,10]。根据已有的报道和经验，选择对苹果树腐烂病菌可能有效的杀菌剂10种，供试原药为各农药厂家生产的商品，名称、有效成分含量、生产厂家详见表1。

1.2 试验方法

药液配制及含药平板制备：将称量好的各药剂分别用无菌水配置成所需最高浓度的100倍母液，再依次稀释成各浓度。无菌条件下，将2mL各浓度药液加入到98mL灭菌融化的PDA培养基中，摇匀后制备含药平板。

测定方法：采用菌丝生长速率法。将腐烂病菌菌株LXS080301接种于PDA平板中央，25℃黑暗培养3d后，在菌落边缘打取直径6mm的菌饼。将菌饼接种于含有相应浓度药剂的PDA平板上，每个处理重复3次，以不含药的培养基为空白对照。25℃黑暗培养，待空白对照菌丝长至培养皿的2/3时，用十字交叉法测量菌落直径，计算各处理对腐烂病菌的抑菌率。

式中，半径的单位为mm。

1.3 田间药效试验

选择生长良好、健康无病的苹果树，用喷雾器将药液均匀地喷洒到树上，直到所有枝条都有药液流下为止，每种药剂处理1棵果树，以喷洒清水的果树为对照。

表2 病情指数分级标准Table 2 Grading standard of disease index

在喷药后的第 0d、7d、14d、21d，分别从每种药剂（表3中各药剂对应的最优浓度）处理果树上剪取3个一年生枝条，在距离叶柄基部1cm处剪掉所有叶片，避免枝条上造成伤口。从枝条基部开始，截取2段长15cm的枝条，每种药剂处理共计6段枝条。将孢子悬浮液均匀地喷洒到枝条上，直到有水滴流下为止，将接种后的枝条插于组培瓶中水培，转移到25℃培养箱中保湿培养。10d后调查各处理枝条的病斑，按照表2（见上页）中的标准进行病情分级。

根据调查结果计算腐烂病的病情指数，同时计算各药剂的防治效果。

2 结果与分析

2.1 不同杀菌剂对苹果树腐烂病菌的抑制作用

由表3可知，不同种药剂对苹果树腐烂病菌的抑菌率存在差异，同一药剂稀释倍数不同，抑菌效果也有差异。结果表明，供试的10种药剂中，多菌灵、咪鲜胺、丙环唑对苹果树腐烂病菌的抑菌效果较好，在相对较低的浓度下，抑菌率仍高达98%以上，能显著抑制腐烂病菌菌丝的生长。

表3 10种杀菌剂对苹果树腐烂病菌菌丝生长的抑制作用Table 3 Inhibition of 10 kinds of fungicides on mycelial growth ofValsa mali

表4 10种杀菌剂喷药后不同时间的防治效果Table 4 Protective effect of 10 kinds of fungicides at different times after spraying

2.2 不同药剂对苹果树腐烂病的田间药效试验

表4显示了不同药剂对苹果树腐烂病的田间药剂试验，由表可以看出，供试10种杀菌剂中，喷药后第0d接种腐烂病菌的处理对枝条的防治效果均能达到98%以上；喷药后第7d接种腐烂病菌的处理，甲基硫菌灵、戊唑醇、肟菌酯、己唑醇及苯醚甲环唑的防治效果较差，为61.45%～68.98%，其他杀菌剂的保护效果均能达到83%以上；喷药后第14d接种腐烂病菌的处理，多菌灵、咪鲜胺和丙环唑的保护效果较好，为80.40%～83.73%；药后21d的处理，戊唑醇、肟菌酯、己唑醇以及苯醚甲环唑的保护效果都降至10%以下，与对照相当，说明上述药剂已失去保护作用。而多菌灵、咪鲜胺及丙环唑的保护效果维持在60%以上，仍有一定的保护效果。

3 讨论

多菌灵是一种高效低毒的广谱内吸性杀菌剂，具有内吸治疗和保护作用。自20世纪70年代中期，其迅速代替有机汞、有机磷杀菌剂，其作用机理为干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂而起到杀菌作用，对由半知菌和子囊菌等真菌引起的病害有特效[11，12]。咪鲜胺是一种广谱高效的咪唑类杀菌剂，其作用机理为通过抑制麦角甾醇的生物合成，从而使菌体细胞膜功能受到破坏而起作用[13，14]，可防治由半知菌及子囊菌引起的多种病害，咪鲜胺具有预防、保护、治疗等多重作用，但无内吸性[15]。丙环唑是属于甾醇抑制剂中的三唑类杀菌剂，其作用机理是影响甾醇的生物合成，使病原菌的细胞膜功能受到破坏，最终导致细胞死亡，从而起到杀菌、防病和治病的功效，具有杀菌谱广泛、活性高、杀菌速度快、持效期长、内吸传导性强等特点，可防治子囊菌、担子菌和半知菌引起的病害[16]。室内药剂筛选结果表明，不同稀释倍数的杀菌剂对苹果树腐烂病菌菌丝生长均有一定的抑制作用，随着稀释倍数的增大，抑制效果减弱，其中多菌灵、咪鲜胺及丙环唑对腐烂病菌菌丝的抑制作用较好。田间药效试验也发现，所测试的10种药剂在喷药后第0d和第7d能有效地保护枝条免受苹果树腐烂病菌的侵染，喷药后的14d，保护效果明显下降，喷药后的第21d只有多菌灵、咪鲜胺及丙环唑的保护效果维持在60%以上，这在室内试验中也得到了验证。

苹果树腐烂病具有潜伏侵染的性质，因此，加强果园的栽培管理，增强树势，提高果树的抗病力，是综合防治的关键。在实际病害防治中建议以多菌灵（有效成分）为主，并与以有效成分为丙环唑或咪鲜胺的药剂交替使用。