李天雪， 胡玉涛*， 韦 笑， 褚朝森

(1.江苏联合职业技术学院连云港中医药分院，江苏连云港 222007；2.连云港市药物研发共性技术中心，江苏连云港 222007)

加味四逆散由柴胡、白芍、枳实、甘草、黄芩、黄连和蒲公英组成，主治疏肝理气，该验方应用范围广泛，因其具有抑制抑郁和神经保护等生物活性[1 - 4]，引起医药行业的关注。中药复方的临床药理是多种有效成分协同作用的结果，现代药理学研究表明四逆散及加味方中活性成分很多，目前检测其活性成分的方法主要有高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV)[5]、高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)[6]和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)[7 - 8]等。近年来，因精确性高、选择性强，LC-MS法在医药化工领域已成为多成分微量分析的首选方法[9-11]，尤其是固相萃取(SPE)及超高效色谱(UPLC)分离技术的应用，使得高通量生物样品分析成为可能[12 - 13]。但关于加味四逆散中多生物活性成分体内定量测定方法的研究尚少。

本实验建立了SPE法处理血浆样品，UPLC-MS/MS法同时检测加味四逆散中6种生物活性化合物的方法，定量限达2 ng/mL。方法为调整加味复方用药剂量提供参考，对四逆散新药开发、临床有效合理用药具有重要意义。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂及材料

安捷伦1290 LC-6460三重四极杆QQQ串联质谱仪，配有四元低压梯度泵和MassHunter工作站(美国，安捷伦科技公司)；Eppendorf 5427 R低温高速离心机(德国，Eppendorf有限公司)；Oasis©HLB固相萃取柱(规格60 mg，美国沃特世科技有限公司)。

柴胡皂苷a(批号：20170722)、芍药苷(批号：20170425)、橙皮苷(批号：20170801)、橙皮素(批号：20170808)、甘草酸(批号：20170706)、甘草苷(批号：20170711)和内标物(IS)金雀异黄素(批号：20170508)，均由南通经纬生物科技有限公司提供(≥99%)。……