刘小琴 舒华娥 肖 行 陈 西 马 遥

白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)的存在是白血病难治复发的根源，也解释了临床上白血病治疗的难点和疑惑[1]。LSC具有很强的生存优势，对化疗药物耐药[2]。近年来越来越多研究证据表明，白血病复发和耐药的根本原因是LSC的存在，多信号系统紊乱导致其对多种化疗药物如柔红霉素耐药是治疗失败和复发的分子基础[3]。在诱导增敏杀伤概念指导下，采用植物多酚调节凋亡信号通路诱导凋亡和提高其对化疗药物(柔红霉素)敏感性的“自亡和它杀”相结合的新方法，有望达到最大限度清除天然耐药的LSC目的[4]。本研究以人急性髓系白血病KG1a细胞株中获得的CD34+CD38-LSC为靶细胞，通过柔红霉素干预发生耐药后，再采用植物多酚干预耐药的LSC，以增殖抑制率、迁移侵袭能力、凋亡率、内/外源性凋亡通路中关键分子变化为指标，评价植物多酚增强柔红霉素耐药的LSC的敏感性的生物学效应，并探明相关的分子机制，为有效清除LSC提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

试剂：人急性髓系白血病KG1a细胞株(南京森贝伽生物科技有限公司，中国)；PCR试剂盒(上海硕盟生物，中国)，MTT试剂盒(北京中杉金桥生物公司，中国)，不含血清培养基、含血清的完全培养基(GIBCO公司，USA)，异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白(武汉博士德，中国)，Transwell 24孔培养板(Corning 公司，USA)，凋亡相关基因Bax(Santa Cruz公司)。96孔板、10 cm2培养皿(Corning 公司，USA)，含EDTA的胰酶(GIBCO公司，USA)。仪器：80 ℃～4 ℃冰箱(日本松下)，高转速冷冻离心机(BiofugeStratos，德国)，培养箱(Queue systems，USA)，细胞培养超净台(苏州净化，中国)，FACSort流式细胞仪(BD公司，USA)，倒置相差显微镜(奥林巴斯，日本)，PCR仪(Rotor-gene，澳大利亚)-高压消毒箱(美国Tuttnauer，美国)。……