孙文栋 佟建洲 张向前 石凤云 李连进 范经世

人脑胶质瘤是颅脑外科常见的恶性肿瘤之一，多种基因的调控其的发生发展[1]。表皮生长因子受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)是表皮生长因子受体(EGFR)最常见的突变类型，在很多肿瘤组织中均呈现高表达，与恶性肿瘤的发生发展密切相关[2]。本研究探讨了人脑胶质瘤组织中EGFRvⅢ的表达情况及其对胶质瘤U87细胞增殖的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2014年3月至2016年9月本院收治的人脑胶质瘤患者54例，均经病理活检确诊，并符合2007年WHO肿瘤分级标准[3]中的Ⅳ级标准，其中男性28例，女性26例；年龄29～67岁，平均年龄(48.7±2.5)岁。所有患者术前均未接受抗肿瘤药物治疗，本研究经我院医学伦理委员会审批同意且患者及家属知情同意。采集患者胶质瘤组织和癌旁组织(距肿瘤组织边缘2～3 cm)，以生理盐水冲洗后于液氮中迅速冷冻，然后置于超低温冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 EGFRvⅢ在不同组织中的表达情况 取2～3 g胶质瘤组织和癌旁组织，分别加入磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行组织匀浆，制成悬液，采用ELISA法测定悬液中EGFRvⅢ的表达量；采用免疫组化法(IHC)测定组织中EGFRvⅢ表达情况：将保存的胶质瘤组织和癌旁组织进行石蜡包埋，制成切片后，按照IHC试剂盒说明书操作：切片置于65 ℃水浴锅中过夜脱蜡，于37 ℃水浴锅中经胃蛋白酶消化30 min，加柠檬酸缓冲液进行抗原修复，加阻断剂作用10 min，用非免疫血清封闭后滴加抗EGFRvⅢ抗体，室温过夜，滴加生物素标记的二抗作用10 min，加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶反应10 min，加DAB显色，在光学显微镜下观察染色情况以PBS替代一抗作为阴性对照。……