彭芳 ，王志 ，王建 ，张功亮 ，钟斌

(1、赣州市人民医院病理科，江西 赣州 341000；2、赣南医学院第一附属医院药剂科，江西 赣州 341000)

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来，结直肠癌的发病率逐年上升，其中有部分结直肠癌是由于错配修复基因突变型失活或错配修复基因甲基化失活[1－7]， 导致微卫星不稳定（MSI）， 从 而 导 致 错 配 修 复 蛋 白 MLH1，PMS2，MSH2及MSH6表达异常。有研究表明P16蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关[8－13]，P16蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物。以免疫组化的检查方法检查结直肠癌中错配修复蛋白 MLH1，PMS2，MSH2和 MSH6以及 P16蛋白的表达情况，并结合统计学分析，分析其在结直肠癌的表达情况。

1 材料和方法

1．1 病例资料 收集本院2016年1月至2017年10月间原发于结直肠腺癌共60例。其中男性35例，女性25例，年龄28～79岁，平均年龄50岁。肿瘤平均最大径4．6cm，31例呈浸润溃疡型，20例呈隆起菜花型，5例呈平坦型，4例呈浅表溃疡型。肿物切面呈实性，灰白灰红色，质中偏硬，灶性区域伴出血坏死。

1．2 实验材料 免疫组化SP法检测试剂盒及DAB显色剂均购自福建迈新生物技术有限公司。

1．3 免疫组织化学方法 免疫组织化学试剂一抗福建迈新生物技术有限公司生产的MLH1，PMS2，MSH2及MSH6多克隆抗体。检测系统采用福建迈新公司的Elivision试剂盒。石蜡切片厚3微米，60度烤箱烤片1h，二甲苯脱蜡，乙醇水化，浸泡5min，3%过氧化氢室温孵育10min，PBS液冲洗，高压锅修复，并自然冷却。二步法Elivision试剂盒中试剂A，室温孵育 20min，PBS冲洗3次，每次5min，加入试剂 B，孵育 30min，PBS冲洗 3次，每次5min。控制DAB显色，蒸馏水冲洗终止反应。……