郑 夺 张桂贤 陈 冠 王文彤 陶遵威

(天津市医药科学研究所，天津 300020)

恶性肿瘤发病率和病死率逐年增高〔1〕，化疗仍是临床治疗的常规手段之一，但大多数化疗药物缺乏特异性，如环磷酰胺(CTX)带来的毒副作用如骨髓抑制、免疫功能低下及肝功能损害等极大限制了其在临床上的应用〔2,3〕。苦豆子又名苦豆草、苦豆根、欧苦参等〔4〕，具有较强的耐旱性能〔5〕，主要化学成分为生物碱、黄酮、多糖和蛋白质等，目前对于苦豆子多糖成分研究较少，且现有研究多集中于提取工艺的优化〔6～8〕。植物蛋白多糖的糖链可影响细胞的增殖与分化，在抗肿瘤及免疫促进方面发挥重要作用〔9〕，因此苦豆子多糖可能对机体免疫有重要影响。本研究以肝癌腹水(HepA)荷瘤小鼠为实验模型，分析苦豆子多糖减毒增效作用。

1 材料与方法

1.1一般材料 仪器：B071型显微摄影器材，日本奥林巴斯；电子分析天平AE240，梅特勒-托利多仪器有限公司。测试样品：苦豆子多糖，样品为淡褐色粉末，使用时用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液供动物灌胃，配制后4℃冰箱保存，使用期限1 w(250 mg/kg)。试验动物、昆明种(KM)小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，SPF级，购自中国人民解放军军事医学科学院卫生环境医学研究所，实验动物合格证号：0001863，许可证号：SCXK-(军)2009-003。动物瘤源HepA，由天津市医药科学研究所肿瘤药物研发中心保存。药品与试剂：氯化钠注射液(生理盐水)批号：2J73G5、3G71B1；地榆升白片，成都地奥集团天府药业股份有限公司产品，批号：140310。CTX(阳性对照药)安瓿瓶装粉针 200 mg/支，江苏恒瑞医药股份有限公司，产品批号：12041025，使用时以生理盐水(N.S)配制成所需浓度。用前新鲜配制，0.5 h 内完成注射(80、40、20 mg/kg)。顺铂(阳性对照药)批号：140203，江苏京森药业股份有限公司，使用时以生理盐水(N.S)配制成所需浓度，用前新鲜配制，0.5 h 内完成注射(1、2、4 mg/kg)。氟尿嘧啶(阳性对照药)批号：1311271，使用时以生理盐水(N.S)配制成所需浓度，用前新鲜配制，0.5 h 内完成注射(40、20、15 mg/kg)。

1.2方法 减毒实验〔10〕：①肿瘤接种。取接种肿瘤7～10 d状态良好的荷瘤动物，常规消毒后抽取少量腹水，推片瑞化染色细胞分类证实肿瘤细胞不少于75%后，将腹水抽出，以腹水与生理盐水1∶4比例稀释，制备成接种用的肿瘤细胞混悬液，在无菌条件下(超净工作台中)完成。吸取混悬液0.2 ml，接种于小鼠右侧腋窝皮下，从取出肿瘤腹水至肿瘤接种完毕，在60 min内完成。②分组与给药：试验分为6组各12只，正常对照组：注射生理盐水(N.S)；模型对照组：腹腔注射CTX 80 mg/kg，3 d；阳性药物对照组：灌胃地榆升白片10 mg/kg；苦豆子多糖高、中、低剂量组：灌胃苦豆子多糖500、250、125 mg。除正常对照组外，其他各组在给药第9、10、11天，均腹腔注射CTX，苦豆子多糖及地榆升白片1次/d，共给药14 d。③样品采集与处理：所有实验动物给药及造模结束后，以眼眶取血法采血20 μl，立即放入加有稀释液(1%冰醋酸)的试管中，采用显微镜检测法，计录外周血白细胞(WBC)数量。采血后，将动物处死，称重，解剖，取出一侧股骨，剥净软组织，以3%冰醋酸10 ml冲出一侧骨髓腔中的细胞成分，做骨髓有核细胞计数(显微镜法)。④以WBC、骨髓有核细胞计数、胸腺指数、脾指数评价药物的减毒效果。增效实验：①肿瘤接种方法同减毒实验。②分组与给药：肿瘤细胞接种后24 h分组并给药。随机分为6组各12只。空白对照组：生理盐水(N.S)；阳性对照组1：CTX 20 mg/kg，顺铂1 mg/kg，氟尿嘧啶15 mg/kg；阳性对照组2：CTX 40 mg/kg，顺铂2 mg/kg，氟尿嘧啶25 mg/kg；阳性对照组3：CTX 80 mg/kg，顺铂4 mg/kg，氟尿嘧啶40 mg/kg；给药组1：CTX 20 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，顺铂1 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，氟尿嘧啶15 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg；给药组2：CTX 40 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，顺铂2 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，氟尿嘧啶25 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg。给药方式：CTX、顺铂、氟尿嘧啶为腹腔注射，苦豆子多糖为灌胃。CTX、顺铂给药1次；氟尿嘧啶给药1次/d，连续4 d；苦豆子多糖给药1次/d，连续7 d。在肿瘤接种后24 h开始给药。③疗效评价：末次给药后24 h处死动物，称体重，解剖并取出肿瘤组织，称取肿瘤重量，以肿瘤生长抑制率来评价药物的体内抗癌效果。肿瘤生长抑制率=(1-T/C)×100%，T为给药组平均瘤重，C为对照组平均瘤重。

1.3统计学方法 应用SPSS12.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1减毒试验结果 与正常对照组相比，模型对照组WBC值、骨髓有核细胞计数和脾指数均显著降低(P<0.05)；阳性药物对照组与模型对照组相比，骨髓有核细胞计数、脾指数和胸腺指数明显增加(P<0.05)。与模型组对照比较，苦豆子多糖低剂量组脾指数显著增高，苦豆子多糖中剂量组骨髓有核细胞数、胸腺指数和脾指数显著增加，苦豆子多糖高剂量组外周WBC值、骨髓有核细胞数、胸腺指数和脾指数均显著增高(均P<0.05)，且苦豆子多糖高剂量组胸腺指数和脾指数高于正常对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2增效实验结果 联合苦豆子多糖给药后，三种化疗药的抑瘤率均有所增加，其中苦豆子多糖能够显著提高CTX和顺铂的抑瘤作用(P<0.05)，抑瘤率可提高20%～30%，见表2。

表1 苦豆子多糖对环磷酰胺化疗HepA的减毒作用

与正常对照组比较：1)P<0.05；与模型对照组比较：2)P<0.05；与阳性对照组比较:3)P<0.05

表2 苦豆子多糖对CTX、顺铂、氟尿嘧啶抑制HepA作用的影响

续表2 苦豆子多糖对CTX、顺铂、氟尿嘧啶抑制HepA作用的影响

与空白对照组比较：1)P<0.05；2)P<0.01；3)P<0.001；与同剂量阳性对照组比较：4)P<0.05；5)P<0.01；6)P<0.001

3 讨 论

本研究结果说明苦豆子多糖对CTX所致的外周血WBC和骨髓有核细胞计数减少、免疫器官萎缩等毒性反应，虽然不能使其完全恢复到正常水平，但均有明显保护作用；另外苦豆子多糖对化疗药物CTX、顺铂、氟尿嘧啶具有较好的增效作用；总之，苦豆子多糖是一种有效的化疗药物的减毒剂，有良好的应用前景和研究价值。