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苦豆子多糖对肝癌腹水荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用

2018-08-15张桂贤王文彤陶遵威

中国老年学杂志 2018年15期
关键词:氟尿嘧啶生理盐水腹水

郑 夺 张桂贤 陈 冠 王文彤 陶遵威

(天津市医药科学研究所,天津 300020)

恶性肿瘤发病率和病死率逐年增高〔1〕,化疗仍是临床治疗的常规手段之一,但大多数化疗药物缺乏特异性,如环磷酰胺(CTX)带来的毒副作用如骨髓抑制、免疫功能低下及肝功能损害等极大限制了其在临床上的应用〔2,3〕。苦豆子又名苦豆草、苦豆根、欧苦参等〔4〕,具有较强的耐旱性能〔5〕,主要化学成分为生物碱、黄酮、多糖和蛋白质等,目前对于苦豆子多糖成分研究较少,且现有研究多集中于提取工艺的优化〔6~8〕。植物蛋白多糖的糖链可影响细胞的增殖与分化,在抗肿瘤及免疫促进方面发挥重要作用〔9〕,因此苦豆子多糖可能对机体免疫有重要影响。本研究以肝癌腹水(HepA)荷瘤小鼠为实验模型,分析苦豆子多糖减毒增效作用。

1 材料与方法

1.1一般材料 仪器:B071型显微摄影器材,日本奥林巴斯;电子分析天平AE240,梅特勒-托利多仪器有限公司。测试样品:苦豆子多糖,样品为淡褐色粉末,使用时用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液供动物灌胃,配制后4℃冰箱保存,使用期限1 w(250 mg/kg)。试验动物、昆明种(KM)小鼠,雌雄各半,体重18~22 g,SPF级,购自中国人民解放军军事医学科学院卫生环境医学研究所,实验动物合格证号:0001863,许可证号:SCXK-(军)2009-003。动物瘤源HepA,由天津市医药科学研究所肿瘤药物研发中心保存。药品与试剂:氯化钠注射液(生理盐水)批号:2J73G5、3G71B1;地榆升白片,成都地奥集团天府药业股份有限公司产品,批号:140310。CTX(阳性对照药)安瓿瓶装粉针 200 mg/支,江苏恒瑞医药股份有限公司,产品批号:12041025,使用时以生理盐水(N.S)配制成所需浓度。用前新鲜配制,0.5 h 内完成注射(80、40、20 mg/kg)。顺铂(阳性对照药)批号:140203,江苏京森药业股份有限公司,使用时以生理盐水(N.S)配制成所需浓度,用前新鲜配制,0.5 h 内完成注射(1、2、4 mg/kg)。氟尿嘧啶(阳性对照药)批号:1311271,使用时以生理盐水(N.S)配制成所需浓度,用前新鲜配制,0.5 h 内完成注射(40、20、15 mg/kg)。

1.2方法 减毒实验〔10〕:①肿瘤接种。取接种肿瘤7~10 d状态良好的荷瘤动物,常规消毒后抽取少量腹水,推片瑞化染色细胞分类证实肿瘤细胞不少于75%后,将腹水抽出,以腹水与生理盐水1∶4比例稀释,制备成接种用的肿瘤细胞混悬液,在无菌条件下(超净工作台中)完成。吸取混悬液0.2 ml,接种于小鼠右侧腋窝皮下,从取出肿瘤腹水至肿瘤接种完毕,在60 min内完成。②分组与给药:试验分为6组各12只,正常对照组:注射生理盐水(N.S);模型对照组:腹腔注射CTX 80 mg/kg,3 d;阳性药物对照组:灌胃地榆升白片10 mg/kg;苦豆子多糖高、中、低剂量组:灌胃苦豆子多糖500、250、125 mg。除正常对照组外,其他各组在给药第9、10、11天,均腹腔注射CTX,苦豆子多糖及地榆升白片1次/d,共给药14 d。③样品采集与处理:所有实验动物给药及造模结束后,以眼眶取血法采血20 μl,立即放入加有稀释液(1%冰醋酸)的试管中,采用显微镜检测法,计录外周血白细胞(WBC)数量。采血后,将动物处死,称重,解剖,取出一侧股骨,剥净软组织,以3%冰醋酸10 ml冲出一侧骨髓腔中的细胞成分,做骨髓有核细胞计数(显微镜法)。④以WBC、骨髓有核细胞计数、胸腺指数、脾指数评价药物的减毒效果。增效实验:①肿瘤接种方法同减毒实验。②分组与给药:肿瘤细胞接种后24 h分组并给药。随机分为6组各12只。空白对照组:生理盐水(N.S);阳性对照组1:CTX 20 mg/kg,顺铂1 mg/kg,氟尿嘧啶15 mg/kg;阳性对照组2:CTX 40 mg/kg,顺铂2 mg/kg,氟尿嘧啶25 mg/kg;阳性对照组3:CTX 80 mg/kg,顺铂4 mg/kg,氟尿嘧啶40 mg/kg;给药组1:CTX 20 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg,顺铂1 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg,氟尿嘧啶15 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg;给药组2:CTX 40 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg,顺铂2 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg,氟尿嘧啶25 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg。给药方式:CTX、顺铂、氟尿嘧啶为腹腔注射,苦豆子多糖为灌胃。CTX、顺铂给药1次;氟尿嘧啶给药1次/d,连续4 d;苦豆子多糖给药1次/d,连续7 d。在肿瘤接种后24 h开始给药。③疗效评价:末次给药后24 h处死动物,称体重,解剖并取出肿瘤组织,称取肿瘤重量,以肿瘤生长抑制率来评价药物的体内抗癌效果。肿瘤生长抑制率=(1-T/C)×100%,T为给药组平均瘤重,C为对照组平均瘤重。

1.3统计学方法 应用SPSS12.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1减毒试验结果 与正常对照组相比,模型对照组WBC值、骨髓有核细胞计数和脾指数均显著降低(P<0.05);阳性药物对照组与模型对照组相比,骨髓有核细胞计数、脾指数和胸腺指数明显增加(P<0.05)。与模型组对照比较,苦豆子多糖低剂量组脾指数显著增高,苦豆子多糖中剂量组骨髓有核细胞数、胸腺指数和脾指数显著增加,苦豆子多糖高剂量组外周WBC值、骨髓有核细胞数、胸腺指数和脾指数均显著增高(均P<0.05),且苦豆子多糖高剂量组胸腺指数和脾指数高于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

2.2增效实验结果 联合苦豆子多糖给药后,三种化疗药的抑瘤率均有所增加,其中苦豆子多糖能够显著提高CTX和顺铂的抑瘤作用(P<0.05),抑瘤率可提高20%~30%,见表2。

表1 苦豆子多糖对环磷酰胺化疗HepA的减毒作用

与正常对照组比较:1)P<0.05;与模型对照组比较:2)P<0.05;与阳性对照组比较:3)P<0.05

表2 苦豆子多糖对CTX、顺铂、氟尿嘧啶抑制HepA作用的影响

续表2 苦豆子多糖对CTX、顺铂、氟尿嘧啶抑制HepA作用的影响

与空白对照组比较:1)P<0.05;2)P<0.01;3)P<0.001;与同剂量阳性对照组比较:4)P<0.05;5)P<0.01;6)P<0.001

3 讨 论

本研究结果说明苦豆子多糖对CTX所致的外周血WBC和骨髓有核细胞计数减少、免疫器官萎缩等毒性反应,虽然不能使其完全恢复到正常水平,但均有明显保护作用;另外苦豆子多糖对化疗药物CTX、顺铂、氟尿嘧啶具有较好的增效作用;总之,苦豆子多糖是一种有效的化疗药物的减毒剂,有良好的应用前景和研究价值。

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