叶励超

（福建医科大学附属第二医院 福建 泉州 362000）

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是当前临床研究多发性硬化疾病的理想动物模型，主要应用同种的中枢神经系统白质抗原及其类似物诱导而成，其发病机理与病理表现均和多发性硬化相似，病变核心均为免疫反应性炎症。目前已有大量研究证实[1]，白介素-17、白介素-23在多发性硬化并发生、发展中发挥了重要的作用。也有研究报道[2]，维生素D在体内经肝脏、肾脏羟化后可形成1-25二羟基维生素D，进而起到免疫调节作用，适用于多发性硬化的防治。本研究拟建立维生素缺乏和补充的EAE小鼠模型，通过观察EAE发病前期、急性进展期和慢性期小鼠神经功能、IL-17阳性细胞表达差异，进而探析维生素D对EAE小鼠病情进展的影响。

1.实验材料

1.1 实验动物

SPF级C57BL/6小鼠，雌性6周龄，体质量20～25g，共48只，购自重庆腾鑫生物技术有限公司。

1.2 实验饲料与试剂

维D缺乏饲料（购自江苏特洛菲饲料公司），维生素D饲料自行制作（先将维生素D溶解于无水乙醇中，制备成1mg/ml的溶液备用，同时将琼脂溶解于蒸馏水中制成1%的溶液经加热煮沸后加入不含有维生素D的合成饲料，搅拌均匀，并在琼脂溶液完全凝固之前，将维生素D溶液加入并混匀，制备成含有维生素D的饲料）。维生素D（购自上海生工），免抗小鼠IL-17多克隆抗体、山羊抗兔IgG（美国Sigma公司），完全弗氏佐剂（美国Sigma公司提），百日咳霉素（美国Sigma公司），MOG35-55（上海翊圣生物）等。

2.方法

2.1 实验分组方法

将48只小鼠随机分6组，每组8只，其中，A组为维生素D缺乏组免疫10天，B组为维生素D缺乏组免疫16天，C组为维生素D缺乏组免疫30天，D组为小剂量维生素D组免疫10天，E组为小剂量维生素D组免疫16天，F组为小剂量维生素D组免疫30天。……