汤锐明，邱惠思，黄 岩，潘辉林，宋慧胜，王 馨，吴华振，冯正富

广州医科大学附属第六医院//清远市人民医院放疗科，广东 清远 511518

长链非编码RNAs（lncRNAs）是一类无蛋白质编码功能且长度大于200 nt的转录本，近年来陆续发现一些lncRNAs参与结肠癌发生发展[1-2]。机制研究发现MALAT1可结合到SFPQ上，释放PTBP2，进而促进细胞增殖和转移[3]。CASC11在结直肠癌组织中高表达，与瘤体大小、淋巴结转移和TNM分期正相关[4]。本研究重点关注位于10号染色体的lncRNA ZEB1-AS1，生物信息学分析发现其表达与结直肠癌患者预后相关，探讨ZEB1-AS1在结直肠癌中的作用及相关分子机制，目前尚无相关报道。本研究为结直肠癌发生发展机制研究提供新的理论依据，为临床结直肠癌治疗提供新的潜在靶点。

1 资料与方法

1.1 细胞及培养

人正常结肠上皮细胞NCM460及结直肠癌癌细胞HT29、LOVO、SW480、SW620和HCT116均由本实验室保存。将细胞接种于含10%胎牛血清的1640培养液中，在37 ℃、5% CO2的培养箱中培养。

1.2 资料收集

21例结直肠癌癌患者手术标本及配对的癌旁组织是在患者知情同意的的情况下术后收集。手术标本做好标记后，保存于–80 ℃超低温冰箱。

1.3 RNA提取及逆转录

将30 mg组织用液氮多次研磨粉碎（或将细胞用预冷的PBS洗涤1次，离心弃上清），加入RTK裂解液700 μL，混匀后，加入700 μL无水乙醇，混匀，12 000 g，4 ℃离心15 min。取上清上柱，离心。弃废液，用RW1洗涤柱子1次，离心。用RW2洗涤柱子2次。空甩，12 000 g，3 min。用水溶解RNA，静置2 min。离心12 000 g，2 min。将RNA样品置于–80 ℃保存。

使用lnRcute lncRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit（广州天根生物有限公司）逆转录，按照说明书配置反应体系。PCR运行程序如下：42 ℃ 15 min，95 ℃3 min。待PCR反应结束后，将样品保存在–20 ℃冰箱。……