S.Heidelberg血清型特异性基因筛选及PCR检测方法的建立与应用
2018-08-01翟立公郭元新王俊颖王蓓蓓
翟立公 郭元新 王俊颖 王蓓蓓
(安徽科技学院,安徽 滁州 233100)
沙门氏菌(Salmonella)属于肠杆菌科的革兰氏阴性菌,是公认的重要食源性致病菌之一[1]。近年来中国沙门氏菌在畜禽制品中检出率高达20%,相比欧美地区形势更为严峻[2-4]。虽然沙门氏菌的血清型较多,已经达到2 600多种,但污染食品并且造成食源性疾病的主要集中在肠炎沙门氏菌亚种的部分血清型当中。经研究[5-6]发现,食品中污染沙门氏菌的血清型根据地域、年份和食品种类不同而存在变化。据报道[1,7],深圳地区鸡肉中德比沙门氏菌和海德尔堡沙门氏菌(SH)检出率较高,分别达到37.9%和20.7%;广西地区水产品中海德尔堡沙门氏菌(SH)检出率为1.35%。因此,针对沙门氏菌优势血清型的检测具有更重要的意义。
针对沙门氏菌血清型的检测,目前主要采用传统培养的方法(GB/T 4789.4—2016),包括增菌培养、选择性增菌培养、显示培养、生化鉴定和血清型分型,需经过7 d左右才能获得检测报告,很难满足现今社会的需要,如果血清的特异性不强或凝集反应较为迟缓,将会对分型造成极大的影响[8]。利用分子检测技术(PCR)一般能在1~2 d内获得结果,而且具有操作过程简单、成本低、检测结果容易判断等优势[9-10]。对于食源性致病菌的分子检测技术来说目的靶点的特异性就成为检测效果的核心问题。Collette Fitzgerald等[11]利用沙门氏菌O抗原合成rfb基因簇的各基因为靶点,建立了沙门氏菌血清群和甲型副伤寒沙门氏菌的PCR的检测技术,经验证准确率达到94.3%。由于沙门氏菌的抗原结构呈现多样性,以此作为靶点对血清型的鉴定需要设计多对引物或多个PCR程序,将造成引物之间的干扰,影响整个体系的检测灵敏度。……
