石中全 李国利 胡艳玲 马丽华

(重庆三峡医药高等专科学校基础医学部，重庆 404120)

动脉粥样硬化是一种慢性疾病，能够诱导高血压、冠心病等心血管疾病的发生，是动脉硬化的一种类型，血管壁变厚、管腔减小等是其共同特点[1,2]。有研究显示，动脉粥样硬化的发生与巨噬细胞转变为泡沫细胞有关，机体的炎症反应导致内皮细胞对白细胞的黏附性增加，在此过程中释放的趋化因子促使单核细胞转变为巨噬细胞，吞噬氧化低密度脂蛋白形成泡沫细胞[3,4]。Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)存在于免疫细胞表面，能够与病原体及其产物相互识别，进而激活巨噬细胞，诱导巨噬细胞分泌炎症抑制，发挥免疫作用[5]。有研究显示，Toll样受体4(Toll-like receptor-4，TLR4)参与动脉粥样硬化过程，在小鼠动脉粥样硬化组织中表达上调，能够诱导巨噬细胞凋亡[6]。本研究以小鼠巨噬细胞Ana-1为研究对象，用ox-LDL处理，体外构建泡沫细胞模型，并用TLR4特异性阻断剂抑制巨噬细胞中TLR4水平，探讨TLR4对巨噬细胞凋亡、炎症因子等影响，以期为研究动脉粥样硬化发生机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1材料 小鼠巨噬细胞Ana-1购自中国科学院细胞库；RPMI1640培养基、胰蛋白酶、氧化低密度脂蛋白(oxidized LDL，ox-LDL)均购自美国Sigma；二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，BCA)蛋白浓度检测试剂盒购自上海酶联生物；细胞RNA提取试剂盒购自美国Sigma；细胞蛋白提取试剂盒购自武汉艾美捷；甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、TLR4引物由上海生工合成；TLR4单克隆抗体购自美国Abcam；活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3，Cleaved Caspase-3)单克隆抗体、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)单克隆抗体、GAPDH单克隆抗体均购自美国CTS；……