黄迪 黄宇 翁杰锋 黄子圣 麦振豪 赵俐 古维立

1广州医科大学附属广州市第一人民医院普通外科（广州510180）；2广州消化疾病中心（广州510180）；3华南理工大学第二附属医院普通外科（广州510180）

乳腺癌是一种严重危害女性健康的常见恶性肿瘤。近40年来，乳腺癌的发病率位居全球首位，全球每年有140万妇女被确诊为乳腺癌［1］。近几十年来，尽管放疗、化疗及多种生物治疗手段有了长足发展，然而，乳腺癌转移、复发及化疗耐药等仍是乳腺癌治疗的难题。有证据表明［2-4］，reversine可以抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，但是目前国内应用reversine作用乳腺癌的研究极为少见，特别是用于三阴性乳腺癌41T细胞的研究尚未见报道。因此，本研究旨在探讨rever⁃sine对小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖和凋亡的影响，并探究其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂 小鼠乳腺癌4T1细胞株（中山大学动物实验中心）；药物reversine（SIMGA公司）；CCK⁃8试剂盒（上海东仁化学科技有限公司）；DMEM培养基干粉、胎牛血清、DMSO（美国Sigma公司）；TGF⁃beta、TIMP1、MMP9抗体（Abcam公司）；Caspase⁃3、bax、bcl⁃2 抗体（Cell Signaling公司）；Aurora B 抗体（Novusbio公司）；Annexin⁃V⁃FITC/PI凋亡试剂盒（南京凯基生物科技发展有限公司）；RIPI裂解液（碧云天生物技术公司）；Millipore聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、电化学（ECL）发光液、垂直电泳槽、Western blot电泳仪、Western blot转膜仪、FACS Calibur流式细胞仪（美国BD公司）；多功能酶标仪（香港基因有限公司）；IX51倒置相差显微镜（日本Olympus）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养及分组 4T1细胞用体积分数为10%胎牛血清加1%双抗的高糖DMEM培养基，于二氧化碳培养箱（37℃，5%CO2）中培养，隔天换液，传代时间为3～4 d，传代前用2.5 g/L的胰酶消化。以加入DMSO的4T1细胞作为正常对照组；……