动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是高血压、冠心病等多种心脑血管系统疾病共同的病理基础，而血脂代谢紊乱和血液流变学改变是其重要的发病机制[1]。熊果酸(ursolic acid，UA)又叫乌索酸，化学名：3- hydroxy- 12- ursen- 28- oic acid，是一种具有抗氧化、抗炎、降血脂等多种药理学作用的五环三萜类化合物[2- 4]。本实验通过高脂饲料喂养结合腹腔注射VD3方法建立AS大鼠模型并同步给予UA进行干预，研究UA对AS大鼠血脂和血液流变学的影响及其对AS大鼠的保护作用。

1 材料与方法

1.1 药物与主要试剂 UA购自陕西慧科植物开发有限公司(纯度≥98%)；辛伐他汀片购自山东方明药业股份有限公司；血脂检测试剂盒购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；HE试剂盒购自北京博奥森科技有限公司。

1.2 实验动物 实验用SD大鼠(雄性，清洁级，鼠龄6周龄，体重180 g～220 g)购自河北省实验动物中心，许可证号：SCXK(冀)2013- 1- 003。

1.3 实验方法

1.3.1 AS大鼠模型的制备、分组与给药 参照杨宏辉等[5]报道的实验方法制备AS大鼠模型：除正常对照组外，其余各组大鼠均通过喂养高脂饲料结合腹腔注射VD3方法建立早期AS大鼠模型，共12周；取100只模型大鼠随机分为模型组、UA 10 mg/(kg·d)组、20 mg/(kg·d)组、40 mg/(kg·d)组和辛伐他汀(SV)1.8 mg/(kg·d)组，各治疗组与造模过程同步开始灌胃给药(12周)，正常对照组和模型组灌胃给予等体积生理盐水。

1.3.2 心脏指数(CI)测定 分别称量各组大鼠体重，麻醉后开胸摘取心脏组织并称其重量，各组大鼠分别取平均值，计算CI：CI(%)=(心脏质量/体重)×100%。

1.3.3 生化指标检测 麻醉后开腹并经腹主动脉取血，离心1 500 r/min，10 min后取血清，通过全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL- C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL- C)水平。

1.3.4 血液流变学和血流动力学指标检测 麻醉后开腹并经腹主动脉取血，加入肝素抗凝，通过LBY- N6型血液流变仪(北京普利生公司生产)检测血液流变学指标[全血黏度(低切、中切、高切)、血浆黏度、血细胞比容和血小板黏附率]。游离右侧颈总动脉，左心室插管，通过MS4000U- 1C生物信号记录系统(广州市龙飞达科技有限公司)监测血流动力学指标[心室内压最大上升速率(lv+dp/dtmax)和心室内压达峰时间(t- dp/dtmax)]。

1.3.5 主动脉形态结构改变的观察及病变分级 麻醉后剥离全长主动脉，经4%多聚甲醛溶液固定、常规脱水、石蜡包埋、切片、常规HE染色、复染和封片处理后，通过显微镜观察主动脉形态结构改变；参照王伟等[6]报道主动脉病变标准进行病变分级(0级～3级)。

2 结 果

2.1 各组大鼠CI测定比较 模型组大鼠CI较正常对照组显著升高(P<0.01)；与模型组比较，经UA 20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)预处理能显著降低AS大鼠CI(P<0.05或P<0.01)。详见表1。

表1 各组大鼠CI测定比较(±s) %

2.2 各组大鼠血脂水平比较 模型组大鼠血清TC、TG、LDL- C含量水平较正常对照组显著升高，HDL- C含量水平显著降低(P<0.01)；与模型组比较，经UA 20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)预处理能显著降低AS大鼠血清TC、TG、LDL- C含量(P<0.05或P<0.01)，经UA 40 mg/(kg·d)预处理能显著升高HDL- C含量(P<0.05)。详见表2。

表2 各组大鼠血脂水平比较(±s) mmol/L

2.3 各组大鼠血液流变学指标比较 模型组大鼠血液流变学各检测指标较正常对照组均显著升高(P<0.05或P<0.01)；与模型组比较，经UA 20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)预处理能显著降低AS大鼠血浆黏度和血细胞比容(P<0.05或P<0.01)，经UA 40 mg/(kg·d)预处理能显著降低全血黏度(低切、中切、高切)和血小板黏附率(P<0.05或P<0.01)。详见表3。

表3 各组大鼠血液流变学指标比较(±s)

2.4 各组大鼠血流动力学指标比较 模型组大鼠lv+dp/dtmax较正常对照组显著降低、t- dp/dtmax显著增加(P<0.01)；与模型组比较，经UA 20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)预处理能显著提高AS大鼠lv+dp/dtmax并显著缩短t- dp/dtmax(P<0.05或P<0.01)。详见表4。

表4 各组大鼠血流动力学指标比较(±s)

2.5 主动脉形态结构改变及病变分级检测结果 显微镜观察HE染色病理切片显示：模型组大鼠主动脉较正常对照组呈现内皮细胞受损、慢性炎症病变、泡沫细胞形成并伴有粥样硬化斑块形成等明显病理性形态结构改变；与模型组比较发现，经UA预处理能明显减轻AS病变程度，且UA该作用具有一定的剂量依赖性，UA40 mg/(kg·d)组效果显著。详见图1。主动脉病变分级结果显示：模型组大鼠主动脉病变2级及以上共17例(85%)，病变分级较正常对照组显著升高(P<0.01)；UA 40 mg/(kg·d)组和SV 1.8 mg/(kg·d)组主动脉病变分级较模型组均显著降低(P<0.01)。详见表5。

A为正常对照组；B为模型组；C为UA 10 mg/(kg·d)组；D为UA 20 mg/(kg·d)组；E为UA 40 mg/(kg·d)组；F为SV 1.8 mg/(kg·d)组。

表5 各组大鼠主动脉病变分级

3 讨 论

血脂代谢紊乱及由其引发的血液流变学指标改变是AS疾病发生发展的重要病理机制[1，7- 8]。血脂水平升高导致血液黏稠度升高，影响血液流变学指标和血流动力学指标[7]；且血脂代谢紊乱导致血管内膜脂质沉积、形成“斑块”而逐渐发展成为AS[8]。既往药理研究发现，通过药物调节血脂及改善血液流变学可有效缓解AS疾病的发生和发展[9- 10]。

血清TC、TG、LDL- C、HDL- C水平是临床血脂分析的常用指标，其中TG、LDL- C水平增高损害血管内皮光滑性，增加引发AS甚至诱发急性心肌梗死的危险性；HDL- C可促进TC代谢表现为对机体的保护作用。血脂在AS的形成和发展中扮演重要角色[11]，在AS和心脑血管各种疾病发展过程中发挥重要作用。人体血浆脂质由TC、TG、磷脂和游离脂肪酸构成，若血脂过多，造成脂质代谢紊乱，血液黏稠度增高，脂类物质在血管壁内膜沉积，逐渐形成小“斑块”，形成AS。主要机制是附着于红细胞膜中的TG、TC含量增加促使红细胞硬化，影响红细胞变形能力，红细胞携氧与释放速度变慢，增加血流黏稠性，致使细胞膜流动性下降，造成血液流变学指标明显异常[12]。因此，血脂含量和血液流变学是观察药物抗AS作用的重要指标。病理生理学研究发现，AS发生及进展程度与血浆TC、TG、LDL- C含量密切相关[13- 14]。王燕[15]研究发现，血液TC、TG含量增加将附着于红细胞膜而导致红细胞膜硬化，影响红细胞的变形能力，导致细胞膜流动性下降，引起血液流变学指标异常，这可能是导致AS疾病发生的重要病理机制之一[16]。

UA是一种具有多种药理学作用的五环三萜类化合物[2- 4]，本研究发现经UA预处理能有效降低AS大鼠CI，抑制主动脉病变，改善血清血脂指标(降低TC、TG、LDL- C含量，并提高HDL- C含量)，改善血液流变学指标(降低全血黏度、血浆黏度、白细胞比容、血小板黏附率)，改善血流动力学指标(提高Iv+dp/dtmax、缩短t- dp/dtmax)，提示UA能通过调节血脂及改善血液流变学、血流动力学而对AS起到一定的防治作用。