张琼，刘婷，彭慧，袁清照

（1.湘潭医卫职业技术学院，湖南 湘潭 411104；2.湖南省中医药研究院附属医院，湖南 长沙 410006）

0 引言

青藤碱(Alkaloid sinomenine，SIN)是从中药青风藤中提取的单体生物碱，具有祛风除湿止痛、消炎、免疫抑制与免疫调节等作用[1,2]，主要用于治疗风湿性、类风湿性关节炎等[3]。目前临床上有青藤碱肠溶片、正清风痛宁注射液、正清风痛宁片等制剂，均为全身给药途径，生物半衰期短、且容易引起全身不良反应[4]。目前国际上已开始将风湿性关节炎新药的研究热点转向皮肤给药系统。其中经皮给药系统中的涂膜剂制备工艺简单，使用方便，给药后可按一定速率释药，避免首过效应，降低药物的毒副作用及其他不良反应。因此将青藤碱制备成局部给药的涂膜剂，以使药物在给药部位的浓度积累并达到持续释药的目的，相对的减少了药物通过全身吸收达到治疗部位时产生的不良反应。本研究对青藤碱涂膜剂处方进行了优选，并采用离体鼠皮考察其透皮吸收行为。

1 仪器与材料

1.1 仪器

岛津20A型高效液相色谱仪（日本岛津）；TP-5型智能透皮仪，南京红蓝电子科技中心；DZKW-4型电子恒温水浴锅，上海科析试验仪器厂；AB104-N型电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；ACS-6型电子计重称，上海华德衡器有限公司。

2.2 试剂

盐酸青藤碱对照品（中国药品生物制品检定所提供）；盐酸青藤碱（西安瑞林生物科技有限公司）；聚乙烯醇（PVA124，西陇化工股份有限公司）、95%乙醇（西陇化工股份有限公司）、亚硫酸钠（西陇化工股份有限公司）；甘油（天津鼎盛鑫化工有限公司）；氮酮（山东佰仟化工有限公司）。

2.3 动物

SD雄性大鼠180-200g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，SCXK（湘）2016-0002。

2 方法与结果

2.1 成膜材料的选择

涂膜剂使用的成膜材料分为脂溶性膜材和水溶性膜材。应用较多的脂溶性膜材有聚乙二醇缩甲醛、聚乙烯醇缩丁醛、聚乙烯吡咯烷酮。水溶性膜材有聚乙烯醇(PVA)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)羟丙基甲基纤维素(HPMC)等。根据文献报道，PVA的成膜性和柔韧性好，黏度适宜，稳定性较好，无毒无刺激，有药用标准，与处方药物无配伍禁忌[5]，因此，将PVA作为成膜材料。我们选择了PVA-1788、PVA-0588、PVA-124三种常用型号进行初步筛选，结果显示使用PVA-124的制剂综合性能最好，所以选用PVA-124作为成膜材料进行涂膜剂的制备。

2.2 涂膜剂的制备

为了改善膜材的成膜性、可塑性，选用水溶性的甘油作为本处方的增塑剂，乙醇为溶媒。由于青藤碱性质不稳定，易氧化，因此加入抗氧化剂亚硫酸氢钠0.4%。加入1% 氮酮作为透皮促进剂[6]。

将处方量的PVA-124用适量蒸馏水溶胀24h，再置于95℃水浴加热溶胀成凝胶状，在不断搅拌下混合均匀作为基质备用。将处方量的青藤碱、甘油、95%乙醇、亚硫酸氢钠、氮酮加入基质溶液中，加蒸馏水至100mL，搅拌均匀，即得。

2.3 成膜处方的筛选

根据文献及预试验结果，采用正交试验设计法，以膜材浓度（A），乙醇含量（B），甘油含量（C）为试验考察因素，每个因素设三个水平，选择用L9(34)正交表安排试验。以成膜时间、外观评分（粘稠度，延展性，均匀度）为考察指标进行综合评分，优选最佳配比。取涂膜剂2mL均匀涂于4cm×4cm的手臂皮肤上，开始计时，当制剂成为不可流动的固态薄膜时停止计时，即为成膜时间。成膜时间得分：成膜时间≤4min记为10分；≤6分钟记为6分；≤8分记为3分，＞8分记为0分。涂膜剂液体粘稠度适宜记为10分；较适宜为6分；一般为3分；差为0分。延展性得分。成膜后均匀无破损，延展性好为10分；较完整存在很小破损，延展性较好记为6分；有部分破损，延展性一般记为3分；破损严重不成形，延展性差记0分。均匀度得分。成膜厚度均匀记10分；略有不均匀记6分；部分不均匀记3分，很不均匀记0分[7,8]。综合评分=成膜时间评分+外观评分。因素水平安排见表1。正交试验安排结果见表2，采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析，分析结果见表3。

表1 成膜处方因素水平表

表2 正交试验直观分析结果

表3 正交试验方差分析

根据以上试验结果分析，PVA-124浓度和乙醇含量对试验结果有显著性影响（P＜0.05），甘油含量对试验结果无显著性影响（P＞0.05）。综合考虑最佳制备工艺为A1B2C2,即：PVA-124 4g，95%乙醇30mL，甘油4mL，按上述制备方法制备，制得的青藤碱涂膜剂成膜时间短，粘稠度适宜，成膜后均匀无破损，成膜厚度均匀，延展性好。

2.4 验证试验

根据上述正交试验最佳处方配比即PVA-124 4g，95%乙醇30mL，甘油4mL，按2.2项下工艺制备3批青藤碱涂膜剂，结果显示平均成膜时间为3.8min，外观质量评分为28.7，综合评分为38.7，说明优化之后的处方制备工艺可靠，重复性良好。

2.5 青藤碱涂膜剂离体透皮吸收试验[9]

取6只健康雄性大鼠，电推剪腹部剃毛，颈椎脱臼处死大鼠，剥离剪下去毛部位皮肤，小心除去皮下脂肪，用生理盐水洗净，临用前用滤纸吸干水分，皮肤未见破损者，即可用于试验。

将同一大鼠皮沿腹中线左右对称地剪取两块皮片，绷于Franz 扩散池上，紧张度适中，皮片角质层向外。量取盐酸青藤碱涂膜剂0.1mL(含青藤碱1000μg)，均匀涂抹于大鼠皮片角质面上；接收池内盛pH7.4的PBS缓冲液（模拟体内生理环境），排除残留气泡，使接收液与皮片紧密接触。接收池容积为17mL，皮片涂药面积为1.5cm2，水浴温度为37.0±0.1℃，磁力搅拌强度为200转/min。涂药后第 2、4、6、8、10、24h取接收液 1mL，HPLC测定其中盐酸青藤碱的浓度。每次取样之后补充预热至37℃的接收液1mL。取浸泡液用0.45μm滤膜过滤后，用HPLC测定盐酸青藤碱的含量并计算累积渗透量Qn(μg)与累积透过率P。按照下式计算不同时间累积渗透量Qn：

Cn为每个时间点接收液浓度，V0为接收池体积17mL

P=(Qn/1000μg)×100%

以时间t为横坐标，各时间点的累积渗透量Qn为纵坐标，绘制青藤碱涂膜剂透皮吸收累积渗透曲线，见图1。

图1 青藤碱涂膜剂透皮吸收累积渗透曲线

对青藤碱涂膜剂的透皮吸收累积渗透量进行Higuchi方程拟合，发现其符合Higuchi方程 (Qn =229.49t1/2-184.74，r=0.9271)，Higuchi方程斜率即为透皮速率常数（J），J=229.49μg·h-1。从图1看出，青藤碱涂膜剂透皮吸收累积渗透曲线趋于对数曲线，在后期逐渐趋于平缓，累积透过率达86.18%，说明青藤碱涂膜剂大部分能透过皮肤进入体循环来发挥药效。

3 讨论

3.1 成膜材料是涂膜剂中药物的载体，我们在参考文献基础上，预试验考察了PVA-1788、PVA-0588、PVA-124三种型号的性能，发现PVA-1788水溶性差；PVA-0588黏附性差，不易成膜；PVA-124水溶性、柔软性、成膜性，抗拉强度以及成膜时间都比较适宜，所以确定使用PVA-124作为成膜材料，并采用正交设计试验优化了处方配比。

3.2 在透皮吸收试验中，我们采用了零级、一级动力学模型和Higuchi模型对青藤碱涂膜剂的透皮吸收数据进行动力学模型拟合，药物的体外释放过程符合Higuchi模型，达到缓慢释放药物的目的。

在后续的研究中，我们会进一步评价青藤碱涂膜剂的有效性和安全性，以期为青藤碱涂膜剂应用于临床治疗风湿性、类风湿性关节炎提供更多的理论依据。