杨 勇

（贵州省安顺市关岭布依族苗族自县畜牧服务中心，贵州 安顺 561300）

在养猪生产中仔猪腹泻病是常见的疾病，也是仔猪死亡的重要原因之一，发病猪临床症状常为腹泻、食欲废绝、脱水、精神沉郁，且感染1周龄以内的哺乳仔猪死亡率最高达100%[1]。通常猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（GRV/PoRV）是引起猪腹泻病的3种主要病毒性病原，其在临床上常单一感染或多重感染[2]。猪流行性腹泻常发生于幼龄仔猪，水样腹泻，病猪常因脱水而死；猪传染性胃肠炎发生于各年龄段猪，临床症状各异，10日龄左右仔猪感染率及死亡率最高；猪轮状病毒病在仔猪感染后常出现体内酸碱平衡紊乱，导致短暂或持久性腹泻，种猪、育成猪则多呈隐性感染，不表现严重的临床症状。因3种病毒临床上常呈混合感染且均以腹泻为主要特征，通过临床症状难以确诊，需实验室检测对其进行确诊。

2017年11月初，贵州某猪场仔猪出现整窝持续性腹泻，为确诊病因，故送检腹泻病死仔猪2头。现将检测过程及结果报道如下。

1 流行情况及临床症状

贵州省关岭县某猪场20日龄左右仔猪出现整窝持续性腹泻，发病仔猪感染初期表现为水样腹泻、食欲减退、精神萎靡，部分仔猪腹泻物呈灰黑色并有腥臭味，后期因脱水消瘦死亡。猪场曾用多种抗生素治疗无效，故实验室初步疑为病毒性腹泻。

2 解剖观察

将病死仔猪解剖后，观察。可见小肠壁黏膜脱落而变薄，肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结肿大出血。剖检结果见图1。

3 病毒RT-PCR检测

取其剖解病死仔猪的肠内容物液氮反复冻融3次后，用TaKa-Ra MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取试剂盒提取样本核酸保存备用。参照文献[3]，分别设计针对PEDV、TGEV和GRV的RT-PCR三对特异性引物，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

应用一步法RT-PCR试剂盒，以上述所提核酸作为模板分别对PoRV、PEDV和TGEV进 行RT-PCR扩增检测。反应体系（共50.0 μL）：RNase Free H2O 12.0 μL，2×1 Step Buffer 25.0 μL，上、下游引物各 1.0 μL，Prime Script One Step Enzyme Mix 2.0 μL， 核 酸 模 板9.0 μL，反应程序为 50 ℃ 40 min ；94 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后，在凝胶成像系统中进行观察，结果显示，PEDV、TGEV和PoRV均呈阳性，结果见图2。

4 讨论

图1 剖检病变观察

图2 病原RT-PCR检测结果

经检测，确诊了引起该起猪腹泻的原因为PEDV、TGEV和GRV混合感染。天气骤冷可能是导致该起病例流行的气候因素。对于PEDV、TGEV和GRV混合感染的防治，应加强饲养管理，搞好环境卫生，保持猪舍清洁、干燥和温暖，加强护理，严格做到全进全出；转群后及时清理粪便及污染的垫料，全面做好消毒工作，可用漂白粉、2%的NaOH或5%～10%的石灰乳进行消毒。因病毒性疾病大多只能从疫苗角度进行免疫工作，所以可选用PEDV、TGEV和GRV的三联苗对种猪进行疫苗免疫，在妊娠母猪产前3～4周进行接种，仔猪多数病毒感染的抵抗力主要来自母源抗体，需保证母猪在哺乳过程中的营养和泌乳量正常。对于PEDV、TGEV和GRV感染无特效治疗药物，当发生该类疫病时，应立即隔离发病仔猪，对腹泻仔猪及时补充电解多维水、葡萄糖、诺氟沙星进行补液防止继发感染。另有文献报道可根据发病猪的体重取磺胺脒、鞣酸蛋白、复合维生素、维生素K3压碎后，添加适量蜂蜜调匀，在病猪的舌面涂抹使其吞服，3次/d；采用中药配方板蓝根75 g、乳汁草50 g、地榆炭50 g和红糖500 g加适量水煎成3 000 mL，2小时1次，每次20 mL，对GRV有较好疗效，发病猪场可对症治疗。