董洪亮，刘乃国，苗双，郑静，倪娜，王楠，成苗青

（滨州医学院附属医院 1.临床医学实验室，2.肿瘤研究中心，山东 滨州 256603）

特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF），是一种慢性炎症性间质性肺疾病，病因不明，是一种常见的致命性肺部疾病，目前尚无有效的治疗方法[1-3]。因而探索其发病机制，寻求新的有效的治疗措施是非常必要的。

有研究发现，PI3K-AKT-mTOR通路与心脏纤维化、肝脏纤维化，以及肾脏纤维化等纤维化疾病发病机制有关[4-6]。也有报道称该通路可能与肺纤维化发病有关[7-8]。活性维生素D3[（1，25-（OH）2D3）]能够通过影响Wnt通路改善博来霉素所致的小鼠肺纤维化[9]，提示1，25-（OH）2D3可能对肺纤维化有一定的治疗作用。但是1，25-（OH）2D3在大鼠IPF中是否对PI3KAKT-mTOR通路有影响尚未见报道。

本研究旨在探讨大鼠IPF发生过程中，肺组织中PI3K-AKT-mTOR信号通路的变化及1，25-（OH）2D3对此通路的影响，评价1，25-（OH）2D3对大鼠IPF的干预作用，为揭示肺纤维化的发生机制和探讨新的治疗措施提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及引物

90只6～8周龄SPF级雄性SD大鼠购自鲁抗医药实验中心（许可证号：SCXK鲁2013000），博来霉素（日本化学株式会社生产，15 mg/支，批号：030201），1，25-（OH）2D3购自德国Sigma公司，HiFi Script Quick gDNA Removal cDNA Kit、Maxima SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix购自北京康为世纪生物科技有限公司，超敏二步法免疫组织化学检测试剂（PV-9001/2）、DAB试剂盒（ZLI-9019）购自北京中杉金桥生物科技有限公司。

应用Primer（version 5.0）软件，根据大鼠PI3K、AKT、mTOR的基因序列，分析设计特异性引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。内参基因GAPDH的引物由上海生工生物工程技术服务有限公司，引物序列见表1。

表1 所用引物序列

1.2 动物实验分组

90只200 g左右雄性SD大鼠，随机分为模型组、治疗组、对照组，每组各10只。……