艾晓辉，李小荣，雷庆良，廖国庆，罗博，刘蔚东，王海，刘安文，付江涛，刘合利

（1.中南大学湘雅三医院 普外科，湖南 长沙 410013；2.湖南省邵阳市中医医院 肿瘤普外科，湖南 邵阳 422000；3.中南大学湘雅医院 胃肠外科，湖南 长沙 410008；4.中南大学湘雅医院 国家卫计委肝胆肠外科研究中心，湖南 长沙 410078；5.广东省深圳市第二人民医院 肛肠外科，广东 深圳 518000）

腺瘤性结肠息肉病（adenomatous polyposis coli,APC）基因即抑癌基因APC，其与许多肿瘤的形成、生物学行为相关[1]。已经证实APC基因不仅与家族性结肠腺瘤息肉病有关，而且与许多散发性大肠癌有关[2-3]。但是国内对APC在原发性胃淋巴瘤（primary gastric lymphoma,PGL）中表达的研究，尚未见报道。本实验通过检测APC蛋白在PGL组织中的表达，初步探讨其在PGL发生、发展中的作用及意义。

1　资料与方法

1.1　一般资料

选取2006年6月-2011年12月在中南大学湘雅医院、湖南省邵阳市中医医院行手术治疗，经病理组织学及免疫组织化学法确诊的45例PGL患者作为PGL组。其中，男性32例，女性13例；年龄39～77岁，平均53.7岁；溃疡型35例，非溃疡型10例；幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）阳性35例，Hp阴性10例；按Ann Arbor改良分期法，ⅠE期24例，ⅡE期21例（见表1）；有淋巴结转移21例，无淋巴结转移24例。所有患者术前未接受化放疗、免疫治疗及其他针对肿瘤的治疗。另取30例所选PGL患者癌旁组织标本，经病理学证实为正常胃黏膜组织作为对照组，均为男性，平均年龄55.3岁。两组患者年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1　Ann Arbor改良分期法

1.2　实验试剂

兔抗人APC多克隆抗体、免疫组织化学染色试剂盒（SP29000）、二甲基联苯胺显色试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.3　仪器与设备

JY3002型电子天平（上海精密科学仪器有限公司），HHS-2电子恒温不锈钢水浴锅（上海南阳仪器有限公司），LEICA DM LB2型双目显微镜（德国Leica公司），Haier医用微波炉（青岛Haier集团），MIAS医学图像分析系统（北京北航软件开发公司），S2-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂），Shandon325型石蜡切片机（英国Shandon公司），DNP-9162型电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司），Motic B5显微摄像系统（厦门麦克奥迪实业集团有限公司）。

1.4　方法

所有标本用10%甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片3张，分别用于苏木精-伊红染色法染色、免疫组织化学法检测APC蛋白，以及磷酸盐缓冲溶液代替一抗作为阴性对照。采用微波修复链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（streptavidin-perosidase,SP）染色技术测定APC蛋白在PGL中的表达，按照免疫组织化学染色试剂盒说明书进行操作（稀释比例1∶150）。取对照组正常胃黏膜组织切片作为阳性对照。

APC的阳性表达均位于细胞质，以细胞质显示棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。对每张切片阳性细胞的染色程度进行计分，无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。按着色面积进行计分，无着色计0分，着色面积＜1/3计1分，1/3～2/3计2分，＞2/3计3分。根据2项得分之和判断其结果：0分为阴性，≥3分为阳性，每张切片选择有代表性的区域，在400倍视野下进行计数，共计5个视野，取其平均值。

1.5　统计学方法

数据分析采用SPSS 24.0统计软件，计数资料以率（%）表标，比较用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　APC蛋白表达与PGL临床病理特征的关系

45例PGL患者中，APC蛋白定位于细胞质，阳性表达率为37.78%（17/45），阴性表达率为62.22%（28/45）。不同性别、年龄及大体形态间患者的APC蛋白阳性表达率比较，经χ2检验，差异无统计学意义（χ2=0.160、0.012和 0.285，P=0.690、0.912和0.593）。临床ⅠE期患者APC蛋白阳性表达率为58.33%（14/24），临床ⅡE期患者APC蛋白阳性表达率为14.29%（3/21），经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=9.244，P=0.002），ⅠE期患者APC蛋白阳性表达率高于ⅡE期患者。有淋巴结转移患者APC蛋白阳性表达率为14.29%（3/21），无淋巴结转移患者APC蛋白阳性表达率为58.33%（14/24），经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=9.244，P=0.002），有淋巴结转移患者APC蛋白阳性表达率低于无淋巴结转移患者。见图1、2和表2。

2.2　正常胃黏膜与PGL组织中APC蛋白的表达比较

PGL组织中APC蛋白阳性率为37.78%（17/45），对照组正常胃黏膜组织中APC蛋白阳性率为90.00%（27/30），经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=20.244，P=0.000），PGL组织中APC蛋白阳性率低于正常胃黏膜组织。见图1、2和表3。

图1　正常胃黏膜中APC蛋白的表达（SP×400）

图2　PGL中APC蛋白的表达（SP×400）

表2　各临床病理特征患者的APC蛋白阳性表达率比较

表3　正常胃黏膜与PGL组织中APC蛋白阳性率比较

3　讨论

PGL是一种比较少见的胃恶性肿瘤，可发生于胃的各个部位，多见于胃体、胃窦部、小弯侧及后壁，多为隆起型或溃疡型肿块，部分呈弥漫浸润性生长。本实验选取PGL患者，其中溃疡型35例（77.78%），非溃疡型10例（22.22%），APC蛋白阳性率分别为34.29%和50.00%，无明显差异，表明PGL中APC蛋白表达与肿块的大体形态无明显关系。近几年来，PGL的发病率呈升高趋势，其中非霍奇金淋巴瘤以每年3%的速度增长，并且发病年龄以青壮年居多[4]。

APC基因是HERRERA等[5]在1986年发现的新抑癌基因，参与肿瘤的发生、发展过程[6]。大量研究证实，APC基因是唯一在结肠上皮增殖中发挥看门作用的基因[7]。遗传突变APC1个拷贝的个体只需1次体细胞APC突变就可以产生肿瘤。近年来研究表明，在绝大多数结直肠癌的发生中，APC-β-catenin-Tcf/Lef通路改变具有重要意义，APC还参与细胞迁移、黏附、染色体、纺锤体分离、细胞凋亡等多种功能[8]。APC是一种抑癌基因，在许多组织中都有表达。有学者发现，大肠癌与大肠腺瘤恶变组织中APC阳性表达率低于大肠腺瘤和正常大肠黏膜组织，APC失表达与大肠癌的发生相关[9]。也有报道称，乳腺癌[10]、胆囊癌[11]、胃癌[12]、肺癌、鼻咽癌及基底细胞癌等组织中APC蛋白表达减弱[13-15]。

本研究结果显示，PGL组织中APC蛋白阳性表达率为37.78%，低于癌旁正常胃黏膜组织（90.0%），提示APC蛋白在PGL的发生中起重要作用。不同性别、年龄患者的APC蛋白表达无显著差异，PGL组织中，ⅠE期患者APC蛋白表达率（58.33%）高于ⅡE期患者（14.29%）。有淋巴结转移患者APC蛋白阳性表达率（14.29%）低于无淋巴结转移患者（58.33%）。本研究结果表明，PGL组织中APC蛋白表达与临床分期、淋巴结转移有关，与性别、年龄及大体形态无关，提示APC蛋白的表达差异不仅是PGL发生中的一个早期事件，还是其发展的一个重要因素[16]。APC蛋白在PGL中低表达，提示其可以作为PGL发生的一个重要检测指标。目前国内外尚没有公认的能够影响胃淋巴瘤预后的因素[17]。APC蛋白在PGL中的作用值得进一步研究，以期掌握PGL患者的临床病理特征，改善预后，从而提高PGL的诊疗水平[18-21]。