翟东改，陈凌，钱平

（江苏苏青生物技术有限公司，江苏无锡 214000）

抗体是由抗原刺激而产生，并能与刺激其产生的抗原发生特异性结合的具有免疫功能的糖蛋白[1]。通常把血清或血浆中的抗体成分称为免疫球蛋白（Ig），不同的重链和轻链组成完整的Ig分子，分别为IgM、IgG、IgA、IgD和IgE等。抗体药物的生产由于其生物料液的复杂性以及对抗体产品要求的严格性使抗体纯化过程成为了抗体生产的关键，该纯化过程约占抗体药物生产成本的50%～80%。抗体的分离纯化一般分为样品的粗提、粗提物精制、抗体精纯三个步骤[2]，抗体生产的基本流程如图1所示。

图1 抗体生产基本流程步骤[3]

常规的抗体分离纯化方法有盐析法、超滤法、色谱层析分离法等，其中色谱层析方法在抗体纯化过程中应用比较广泛，主要包括离子交换层析、疏水层析、亲和层析、凝胶过滤等。亲和层析由于其高选择性、特异性，成为抗体纯化非常有效的方法之一，同时可以减少纯化步骤，缩短纯化时间。

1 常规分离方法

1.1 盐析法

根据不同的蛋白质的疏水性特点，提高盐浓度、增加其疏水性，从而使蛋白沉淀。影响盐析的主要因素为温度、pH、样品浓度。通常盐析法作为抗体的粗提技术，要想获得高纯度的抗体需要与其他的色谱方法结合。

1.2 超滤法

超滤技术是20世纪70年代兴起的一种新的分离技术，该技术成本及能耗低，操作条件温和，特别适用于活性分子的提取。但随超滤的不断进行，膜容易出现污染，需要定期的进行膜清洗，另外在超滤过程中蛋白容易发生聚集。……