邵建业，孙林，赵巍，王斌

（1.青岛大学生命科学学院，山东青岛 266071；2.青岛大学基础医学院，山东青岛 266071）

自噬与癌症、神经退行性疾病、各种人类发育过程有关，相关的自噬研究在过去十几年中显著增加[1]。在真菌中，cAMP信号通路参与多种生物学过程，并且已被证明对免疫抑制的侵袭性曲霉病鼠科动物模型的毒力至关重要。cAMP途径的主调控因子PKA是真核生物中重要的应激反应调节剂[2]。PKA为异四聚体，是细胞中调节生长、代谢、增殖的一个重要的信号分子。当cAMP与调节亚基结合时，发生构象变化，释放催化亚基使其自磷酸化并磷酸化下游靶标。当cAMP结合调节亚基时，会发生构象变化，其释放催化亚基自动磷酸化下游目标[3]。PKA信号通路参与了烟曲霉的生长、孢子的形成过程以及影响烟曲霉的毒力，但其对曲霉菌自噬的影响并不明确。

为研究烟曲霉中PKA与其自噬水平的关系，本实验采用ΔPkaR突变株和WT株，从孢子的存活率、菌丝营养获取能力、自噬小体的形态以及自噬相关的基因表达来反应自噬水平，验证烟曲霉中的自噬是否受PKA通路的调控，为丝状真菌中的自噬机制提供新的实验证据[4]，争取为预防和治疗IA提供一个新的靶点。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

烟曲霉（A.fumigatus）野生菌株（简称WT）为美国辛辛纳提大学病理和实验医学系Judith C Rhodes教授惠赠，PKA调节亚基突变株（简称ΔPkaR）为本实验室构建，置于37℃恒温培养箱中孵育。

1.1.2 培养基

AMM液体培养基、AMM固体培养基、YG液体培养基、YG固体培养基、WA培养基。

1.2 方法

1.2.1 营养缺乏时营养吸收能力的检测