孙 心，梁宛楠，姜 宇

（哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

鸭病毒性肝炎（DVH）是幼龄雏鸭的一种高度致死性急性传染病，特征是发病急、传播快、死亡率高，临诊表现角弓反张，病理变化为肝炎和出血[1]。该病常给养鸭场造成严重的经济损失。鸭肝炎病毒共分为3个血清型，分别是血清型Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型，3个型相互之间无抗原相关性[2]。本试验通过对江苏省某发病的养鸭场进行病料采集，分离病毒并通过中和试验，RT-PCR试验等试验进行鉴定。

1 试验材料

SPF鸭胚及SPF鸭（哈尔滨兽医研究所）；Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清、Ⅲ型鸭肝炎病毒阳性血清；焦碳酸二乙酯（DEPC）、dNTP、rTaq酶、胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒以上均为宝生物有限公司；PMD18-T载体、感受态细胞（DH5ɑ）（Pro⁃mega公司）；注射用青霉素钠（哈药总厂）；注射用硫酸链霉素（山东鲁抗限公司）。

2 试验方法

2.1 病料采集及其处理

无菌采集江苏省某鸭场病死雏鸭的肝、脾组织，剪碎磨细，用灭菌生理盐水按1∶5稀释成混悬液，过滤后收取滤液，加入氯仿（终浓度为5%），振荡15 min后，3 000 r·min-1离心20 min，收集上清液，加入双抗，做为分离接种样品，并保存于-70℃冰箱备用。

2.2 病毒分离培养

取分离的样品进行培养。用灭菌生理盐水做100倍稀释，经尿囊腔接种10日龄鸭胚，每胚0.2 mL，置37℃孵化，观察至168 h。弃去24 h以前死亡的鸭胚，收集24～72 h死亡的鸭胚，无菌吸取鸭胚液，-20℃保存备用，并观察鸭胚的病变。

2.3 病毒鉴定

2.3.1 鸭胚中和试验

将病毒液用生理盐水稀释至200ELD50/0.2mL，与等量抗鸭肝炎病毒血清Ⅰ型特异性血清混合，置37℃水浴中和1 h。同时设病毒对照（病毒液与等量生理盐水混合）。……