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空肠弯曲菌脂多糖对大鼠脊髓髓鞘损伤的实验研究

2018-06-21,,,,

中国人兽共患病学报 2018年6期

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空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni,Cj)是常见的人兽共患细菌性肠道病原菌,临床约90%的急性细菌性肠炎均与该菌相关。同时,Cj感染是导致格兰-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome,GBS)的主要病因之一。大量的临床和动物实验研究证实,Cj感染后血清中出现被激发抗GM1和抗GDla等抗神经节苷脂自身抗体,从而导致周围神经损伤,认为自身免疫性炎症是GBS病变机制之一[1]。目前尚不清楚空肠弯曲菌脂多糖(Cj-LPS)是否会引起髓鞘损伤。本研究中,我们分别用Cj-LPS和特异性LPS抗体免疫大鼠,观察大鼠脊髓形态学变化,神经营养因子-3(NT-3)及其受体TrkC和神经生长抑制因子NogoA及其受体NgR mRNA的表达,探讨Cj-LPS对大鼠脊髓髓鞘损伤的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物及分组 60只SPF级雄性Wistar大鼠,体重200~300 g,由浙江大学实验动物中心提供,许可证号:SYXK(浙)2012-0178。将大鼠随机分为对照组(NC组),脂多糖组(Cj-LPS组),及LPS抗体组(Anti-LPS组)。每组各20只大鼠。

1.2Cj-LPS,抗LPS试剂的制备及动物免疫 Pennor O∶19型空肠弯曲菌菌种购于美国菌种保藏中心(ATCC),厌氧培养。使用Westphal热酚水法提取LPS,其纯度通过考马斯亮蓝染色鉴定达到99%。通过亲和层析法制备LPS抗体。称取2 g环氧树脂活化的琼脂糖凝胶6B和8 mg LPS填充制备层析柱,将硫酸铵处理的Cj特异性免疫血清上柱层析,收集洗脱液并立即透析,浓缩储存待用。

Cj-LPS组以LPS、完全弗氏佐剂、生理盐水溶液混匀充分乳化后,腹股沟、背部皮下多点注射。对照组以等容的完全弗氏佐剂、生理盐水和生理盐水皮下注射。分别在初次免疫后1周、2周时,同样方法加强免疫。LPS抗体组分别于实验2、3周,取大鼠特异性抗CjLPS IgG加等量不完全弗氏佐剂,乳化后,于小脑延髓池注射。……

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