朱国念，倪银芸，吴思思

(四川大学 华西医院公共实验技术中心，成都 610041)

在基因治疗中，时常需要使用大质粒，用于传输大编码序列如全长肌营养不良蛋白基因[1]或同时转染含有多个基因的大质粒(如用于诱导多能干细胞重编程)[2]。对于大基因的转染，病毒转染法通常不是最好的选择，因为它们可以携带的总DNA数量有限；此外，它们可能存在许多安全性问题，特别针对临床应用的限制。目前基因治疗研究最多的是通过脂质体介导法、磷酸钙沉淀法、电穿孔法及显微注射法等技术实现[3-4]，不同基因转染方法，其转染效率也具有一定的差别。其中脂质体介导法具有安全、操作简便、对细胞毒性低、低免疫原性等特点而得到广泛的应用[5]。然而，在体外脂质体转染效率会随着质粒大小的增加而下降，脂质体包裹外源DNA向细胞质扩散过程中强烈依赖于DNA的大小；同时通过脂质体转染在体内也观察到随着质粒的大小增加时，转染效率下降。另一方面，尽管在阳离子脂质介导的转染中，与小质量分子相比，大质量的质粒在核递送过程中更易受损，已有研究使用等效质量或摩尔浓度的不同大小的构建体观察到这种效应，表明质粒的核递送可能受细胞内转运的速率的限制，小质粒通过快速转运通过细胞质来避免降解，而不是通过饱和细胞防御[6]。

卵巢癌细胞株SKOV3，是用于化学药物及重组载体对肿瘤细胞治疗效果评价的重要细胞系。此细胞也经常用于基因治疗有关功能的研究，在基因敲除实验中细胞实验部分最常采用的是外源基因转染的方法来实现敲除，故采用SKOV3细胞株来研究转染试剂的效率，为以后基因治疗提供更多的基本思路[7-9]。……