霍雪萍，张琳萍，赵向绒，刘勤社，王海芳

1.陕西省人民医院 中心实验室，陕西 西安 710068；2.西安交通大学 医学部中西医结合专业，陕西 西安 710061；3.陕西省中西医结合心血管病防治重点实验室，陕西中医药大学，陕西 西安 712046

在研究分子机理时，检测相关基因在mRNA水平的表达差异是重要环节，目前多采用实时定量 荧 光 PCR（quantitativereal-timePCR，qRTPCR）方法，具有定量准确、灵敏度高、快速简便及高通量等特点[1]。制备高质量的RNA，选定表达稳定的内参基因，对目的基因的相对表达量进行校正，是获得真实准确的实验数据的前提。

核酸质量的控制是对qRT-PCR实验结果质量控制的第一步。核酸在260nm处有最大吸收峰，蛋白质在280nm处有最大吸收峰，盐和小分子在230nm处有最大吸收峰。D260nm/D280nm和D260nm/D230nm是核酸纯度的指示。高质量RNA的D260nm/D280nm能达到 1.8～2.2，如果比值低于 1.8，表示存在蛋白质或酚类物质的影响；D260nm/D230nm值应大于2.0，若比值小于2.0则表明样品被糖类、盐类或有机溶剂污染[2]。以往的研究关注D260nm/D280nm值对qRT-PCR结果的影响较多，而对D260nm/D230nm值的影响关注较少。

我们在利用qRT-PCR法检测肿瘤坏死因子α（tumornecrosisfactor α，TNFα）调控下游细胞间黏附分子1（intercellularcelladhesionmolecule-1，ICAM-1）基因表达的研究中，发现RNA质量对于内参基因的选择和基因表达水平的评价分析具有显著影响。在此进行报告，以期为相关研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠动脉内皮细胞（arterialendothelialcell，AEC）购自上海拜力生物科技有限公司；RPMI-1640细胞培养基和胎牛血清购自Clontech公司；细胞培养用青霉素/链霉素和胰蛋白酶购自碧云天生物技术研究所；重组小鼠TNFα购自北京义翘神州生物技术公司；……