柯吴坚 黄涛 张君 吕萍 薛耀华 张晓辉 王柳苑 刘雅慧 郑和平

510009广州，南方医科大学皮肤病医院

不同个体感染梅毒螺旋体（Treponema pallidum，Tp）后临床表现和治疗反应各异［1］，提示Tp感染过程中可能存在宿主遗传易感性或Tp基因致病性差异［2］。然而，大量梅毒宿主遗传易感性单核苷酸多态性（single nucleotidepolymorphisms，SNP）数据表明，宿主SNP与Tp遗传易感性均无显著相关［3-5］。因此Tp基因SNP导致的致病性差异将成为未来的研究热点［2，6］。我们从广东地区1例梅毒患者皮损中分离Tp临床株（命名为广东1株，简称GD1株），在兔睾丸中连续传代培养，通过目的基因DNA片段测序分析广东地区Tp基因编码区非同义SNP（non-synonymous SNP，nsSNP）位点突变，为后续GD1株全基因组测序奠定研究基础。

一、对象与方法

1.对象：患者为30岁男性，因阴茎无痛性溃疡9 d就诊。体检：阴茎表面多个浅表无痛性溃疡，伴双侧腹股沟淋巴结肿大。实验室检查：溃疡分泌物暗视野显微镜检查阴性，甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）阴性，梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）阳性。7 d后复查溃疡暗视野显微镜检查阴性，TRUST阴性，TPPA 1∶160阳性。本研究通过南方医科大学皮肤病医院医学伦理委员会批准（批件号：GDDHLS-20170610），患者签署知情同意书。

2.GD1株的分离和传代培养：轻挤患者硬下疳皮损，用无针头5 ml注射器收集皮损中的浆液性渗出液，加入到含20%非感染兔血清中，立刻接种于3月龄、体重约3 kg、经梅毒螺旋体免疫荧光抗体试验（FTA）和性病研究实验室试验（VDRL）双重验证排除Tp感染的成年新西兰白兔双侧睾丸内，每个睾丸接种1 ml。待形成睾丸炎后，兔子处予安乐死，手术取睾丸，制备成菌悬液，采用暗视野显微镜、TP0548 PCR、测序和基因分型多重验证是否传代成功。……