黎运呈 曾芳 王秋景 郑迪 杨喆娟

随着人们生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）患者日益增多。NAFLD进一步发展，约15%患者发展至肝硬化，3%进展至最终的肝衰竭[1-3]。NAFLD是一类肝组织学改变与酒精性肝病相类似，但无过量饮酒史的临床病理综合征[4]。NAFLD在临床上以肝功能异常为主要表现，肝细胞的病理损伤尤以肝细胞线粒体损伤较为显著。线粒体是肝细胞重要的细胞器之一，同时也是具有完整结构和生化功能复杂、多变的细胞器，细胞内和细胞外环境的变化可导致线粒体的结构和功能异常，而肝线粒体的病变与细胞凋亡的发生密切相关[5-6]。现代药理学研究表明，山楂叶总黄酮（hawthorn leaves flavonoids，HLF）具有降血脂、抗氧化、降糖、抗血小板聚集等作用[7-8]。笔者通过观察HLF对NAFLD细胞凋亡的影响，旨在揭示NAFLD发病的分子机制，为中药干预治疗NAFLD提供理论依据，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 HLF（长春三九生物制药，批号：20140823）；人正常肝细胞L-02株，购自中科院上海细胞研究所细胞库；FBS购自杭州四季青公司；油酸（OA）购自天津风船化学试剂科技有限公司；软脂酸（PA）、油红O、二甲基亚砜（DMSO）购自美国Sigma公司;达氏修正依氏培养基（DMEM）和小牛血清（FCS）购于美国Gibco公司；TG试剂盒、考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒购自南京建成生物工程公司。化学药品与试剂：Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒购于美国BD公司；MTT购于瑞士罗氏公司；SDS-PAGE试剂购于美国Sigma公司；PVDF膜购于德国 Millipore公司；Caspase-9、Bcl-2、Bax和 β-actin抗体购于Cell Signaling Technology；羊抗兔和羊抗鼠二抗购于美国Bethyl公司。Cytochrome C购于美国Bio－Vision公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人正常肝L-02细胞用含有10%FBS的DMEM培养液，于37℃、含5%CO2的温箱中培养72h，细胞70%～80% 融合时，以0.25%胰酶/0.02%EDTA消化传代，更换培养液。……