张姗姗，冷 雪，时 坤，李健明，宫庆龙，刘 艺，孙志博，刘亚东，杜 锐

(吉林农业大学,长春 130118)

猪伪狂犬病毒(Porcine Pseudorabies Virus，PRV)是猪伪狂犬病病原体[1]，可引起新生仔猪的致命感染、育肥猪呼吸道症状和母猪繁殖障碍，给养猪业造成严重经济影响[2]。PRV的一些主要糖蛋白参与病毒复制和传播，其中gE和gI基因是PRV增殖的非必需蛋白，同时具有协同控制毒力的功能，gE基因还可作为鉴别野毒感染和疫苗免疫的重要蛋白[3-5]。gD和gB糖蛋白是病毒复制所必需的糖蛋白，同时也是PRV重要的免疫原性蛋白，诱导机体产生中和抗体和细胞免疫反应[6-7]。TK基因(胸苷激酶)是PRV的非必需和主要的毒力基因，对病毒在中枢神经系统中的复制起重要作用[8]。

自2012年以来，中国许多Bartha-K61疫苗免疫猪场再次爆发猪伪狂犬病，特别是在猪群密集地区广泛传播。在我国多个省份的猪伪狂犬病疫苗免疫猪场的发病率和死亡率呈不断上升趋势，研究表明一些重要的糖蛋白在多个方面有一定程度的变异，出现了新的发病特征，存在毒力增强的情况，疫情更加难以控制，给养猪业构成了严重的经济负担。为了解吉林省某地区分离的PRV JL1株的遗传变异情况，对其主要基因进行克隆测序及遗传变异分析，以期为今后吉林省PRV新型疫苗的研制和猪伪狂犬病的预防和净化提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒与试剂 PRV JL1流行毒株，实验室保存；大肠杆菌JM109感受态细胞，pMD18-T Vector，Ex Taq DNA聚合酶，PrimeSTAR HS DNA Polymerase，Marker DL2000，250 bp DNA Ladder均购自TaKaRa公司；DNA Virus Kit购自OMGEA公司；凝胶回收试剂盒及质粒提取试剂盒购自Oxygen公司。……