刘湘花, 张俊霞, 王会丽, 李晓冰

(河南中医药大学 a.病理实验中心；b.基础医学院，郑州 450046)

0 引 言

电镜最突出的优越性主要表现在其具有很高的分辨率，适用于各种研究样品的需要，在生物学研究领域中是其他仪器所无法取代的[1]。在电子显微技术中，生物样品需要用重金属盐类浸染，使样品中各种细胞器或大分子吸附不同数量的重金属原子，以增加样品内各种结构的电子密度，增加图像反差 。由于生物体组织和细胞成分主要是由C、H、O、N等轻元素组成，这些原子序数低，对电子的散射能力较弱，相互之间的差别很小，且制作超薄切片时通常把生物样品包埋在环氧树脂[2]中，这些聚合树脂也多为轻元素组成，这样会造成样品与包埋剂两者质量厚度差异很小。由于以上原因，生物样品本身的固有反差很弱。因此，必须采取适当的措施来提高图像的反差，本实验室在制样处理和电镜操作技术方面积累了一些增加图像反差的经验。

1 传统染色方法的改良

传统的染色方法是采用醋酸双氧铀柠檬酸铅双染法[3]。本实验室采用“漂浮式滴染法”[4]，电镜下观察组织结构清晰、无污染。但样品用戊二醛固定时间过长，用此方法染色后，细胞结构反差不够理想，这时可再重复铀染(10 min)铅染(5 min)1次，能明显提高样本反差(见图1、2)。

图1 传统方法染色，线粒体结构显示模糊

图2 改良方法染色，线粒体结构明显清晰

在重金属盐染色过程中，容易出现染色效果欠佳，分析其原因及克服方法：①标本本身前固定处理不好，标本体积过大，取材时间过长，取材环境温度过高等。……