詹晓丹

摘要：大豆作为重要的副食品原材料、油料以及饲料原材料，其中除了含有大量的蛋白质和油脂之外，还含有一定量的可溶性糖类，最近的研究表明，这些糖类可以起到促进内源性雙歧杆菌活动的作用，可以使内源性双歧杆菌活性增强，起到更好的抑制结肠内腐败菌生长的积极作用。本实验对大豆低聚糖国标检测方法中的流动相比例以及液相色谱条件，包括柱温和检测器温度等进行了一定程度的调整，回归曲线获得了较好的线性表现，回收率也达到87%—111%，为实验室工作人员找寻更加快速、准确、经济的大豆低聚糖检测方法提供一些参考和帮助。

关键词：大豆；低聚糖；高效液相色谱；反相色谱

中图分类号：S5 65.1

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）03-0014-01

大豆低聚糖一般在酸性条件下的热稳定性较佳，目前我国对于大豆低聚糖的检测分析一般是使用色谱法，常用方法一般包括定性以及粗略定量的纸色谱法、薄层色谱法及准确定量的气相色谱法、离子交换色谱法以及高效液相色谱检测方法。

目前，我国检测大豆低聚糖一般采用国家推荐性标准《GB/T 22491-2008大豆低聚糖》中附录A规定的高效液相色谱法，采用反相键合相色谱进行检测。但在试验中发现，这一国标推荐的方法存在检测时间比较长，基线稳定性不佳，数据精密度不高，重复率达不到理想效果，回收率不稳定等问题。针对以上所述国标方法中存在的种种问题，为了达到缩短检测时间，使待测组分达到更好的分离效果，同时提高精密度和准确度的目的，本实验对大豆低聚糖检测方法的某些步骤和参数进行了一定程度的调整，为实验室工作人员找寻更加快速、准确、经济的大豆低聚糖检测方法提供一些参考和帮助。

1 实验原理

高效液相反相键合相色谱法测定大豆中低聚糖含量的原理如下：色谱的固定相配体交换树脂选用经过高强度磺化处理过的阴离子交换树脂，具有极强的电负性，而其上带有活泼性较强的金属元素，这些金属元素极容易失去电子，形成金属阳离子。金属阳离子与树脂上强电负性的磺酸基发生作用，由于正负电荷的吸引力作用，金属离子能够牢固的被固定在树脂上不至于被洗脱。大豆低聚糖分子一般带有负电荷，实验时与表面带有金属离子的树脂发生作用，低聚糖中的负电荷与金属离子的正电荷发生作用，从而留存于树脂表面，但低聚糖与金属离子的相互作用没有金属离子与磺化树脂的作用力那么强，因此在实验过程中逐步被流动相洗脱，进而达到与其他组分分离的目的。

2 实验材料与方法

2.1 仪器及试剂

蔗糖标准样品；棉籽糖标准样品；水苏糖标准样品；乙腈（色谱纯）；无水乙醇（色谱纯）；分析天平（d=0.O01 g）；高效液相色谱（附示差折光检测器）；一级实验室用水。

2.2 实验方法

标准曲线绘制：用蔗糖标准样品、棉籽糖标准样品和水苏糖标准样品用60%的乙腈溶液配置成0.01 mg/L的标准储备液；再分别配制成一定浓度的蔗糖、棉籽糖、水苏糖标准系列溶液，经过0. 45 μm滤膜过滤备用。分别使用国标方法和优化方法进行实验，依次进样分别得到各浓度低聚糖的峰面积，以配置浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

3 实验条件

国标法参考条件：色谱柱：Kromasil- 100氨基柱；流动相：80%乙腈=20%去离子水；流速：1 mL/min；检测器：RID示差折光检测器；色谱柱温度：30℃；检测器温度：30℃；进样量：10 μL。

优化方法参考条件：色谱柱：岛津Inertsil氨基柱；流动相：65%乙腈=35%去离子水；流速：1 mL/min；检测器：RID示差折光检测器；色谱柱温度：35℃；检测器温度：40℃；进样量：10 μL。

4 数据及分析处理

国标方法检测三种大豆低聚糖的回归曲线分别为：C=0. 009236A+O. 227： C=0. 009865A+0. 297； C=0. 008988A+0. 346。采用优化方法检测三种大豆低聚糖的回归曲线分别为：C=0. 009769A+O. 289； C=0. 009932A+0. 381； C=o.009645A+O.312。重复进样检测精密度，国标方法精密度平均为RSD=0.82%，优化方法平均为0.89%。国标方法检测过程中，出现了倒峰的现象，并且实验时间较长为30 min，优化实验中降低了流动相中乙腈的含量的情况下，各峰能够较好的分离并且全部峰都能够在15 min内完成出峰。

5 回收率试验

在已知低聚糖含量的大豆粉碎样品中定量加入三种低聚糖的标准品，按照优化后的实验方法进行检测，计算回收率，蔗糖回收率在89%—96%，棉籽糖的回收率为87%—108%，水苏糖的回收率为92% -111%均达到回收的要求。

6 结论

优化后的大豆低聚糖检测方法能够达到实验的精度要求，并且改善了大豆低聚糖出峰的分离，并且有效缩短了试验时间，提高了效率，能够准确的测定大豆中各类低聚糖的含量。