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生鲜乳中菌落总数检测方法的比较研究

2018-05-03张三粉王丽芳冯小慧康博洋

畜牧与饲料科学 2018年4期
关键词:国标总数平均值

张三粉,王丽芳,杜 琳,宋 洁,冯小慧,康博洋,崔 艳,骆 洪

[内蒙古农牧业科学院资源环境与检测技术研究所 农业部农产品质量安全风险评估实验室(呼和浩特),内蒙古 呼和浩特 010031]

随着居民生活水平的日益提高,牛奶已经成为人们日常生活中的重要食品之一,牛奶质量安全也逐渐成为全社会普遍关注的焦点问题。菌落总数是牛奶质量安全的风险因子之一,在挤奶、储存、运输、生产、销售等各个环节中都有污染的风险,一旦污染可能导致食源性感染甚至中毒。

目前,生鲜乳中菌落总数检测方法主要包括国标法和测试片法。国标法具有良好的准确度和灵敏度,但操作繁琐;测试片法所需的器材体积小、重量轻,方便运输携带,且不需要灭菌,具有操作方便和快捷的特点。该研究旨在通过采用统计学方法比较Peelplate 3M测试片法和国标法对生鲜乳样品菌落总数测定结果的差异,探讨测试片法替代国标法的可行性;在该基础上,对Peelplate 3M测试片法中样本不同培养时间对检测结果的影响进行分析,以期为生产实践中科学选取生鲜乳菌落总数的测定方法提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品及来源

奶罐奶样品分别采集自内蒙古呼伦贝尔市(37 个批次)、通辽市(35 个批次)、呼和浩特市(30个批次),主要取自运输环节;乳头奶:45批次。

表1 呼伦贝尔市生鲜乳样品中菌落总数不同检测方法的测定结果分析 份,万个CFU/mL

表2 通辽市生鲜乳样品中菌落总数不同检测方法的测定结果分析 份,万个CFU/mL

1.2 仪器设备

无菌均质器(SCIENI-11L)购自宁波新芝生物科技有限公司;调速振荡器(HY-8)购自常州国华电器有限公司;生化培养箱(SHP-150型)购自上海精密实验设备有限公司;超净工作台(YJ-875)购自苏州净化设备公司;高压灭菌锅(MY-54A)购自上海新诺仪器设备有限公司。

1.3 培养基

平板计数琼脂培养基、无菌生理盐水均购自北京陆桥技术股份有限公司,Peelplate 3M测试片由美国3M微生物公司提供。

1.4 采样方法

对于生鲜乳收购站的储奶罐,采样前先开动机械式搅拌器搅拌5 min;对于没有配备机械式搅拌设备的储奶罐,采样前先用人工搅拌器探入灌底,采取从下至上的方式搅拌30次以上。样品充分混匀后,用液态乳铲斗从表面、中部、底部3点采样,将采集到的样品混合至4 L塑料容器中,充分混匀后,用采样瓶分装,根据检测内容和指标要求,每份样品不少于100 mL。

1.5 生鲜乳中菌落总数检测方法

1.5.1 国标法:参照GB 4789.2—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》[1],具体步骤如下:在无菌操作下,对生鲜乳样品进行稀释:用10 mL灭菌吸管吸取样品25 mL,缓慢注入225 mL的生理盐水中,样品稀释液记为10-1液体。吸取10-1样品液1 mL,沿管壁缓慢注入9 mL稀释液中,依次制成3个稀释度的样品液。从制备最初的稀释液至倾倒培养时间不宜超过15 min。

分别取 10-3、10-4、10-5稀释度的样品液1 mL倾注接种。每个梯度每种培养基做2个平板,同时做空白对照。待琼脂凝固后倒置培养37℃,48 h后进行菌落计数。

1.5.2 Peelplate 3M测试片法:采用无菌操作方法,按照国标法制备稀释梯度溶液。将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。使用吸管将1 mL梯度稀释溶液垂直滴加于测试片中央,用模板压下,切勿扭转压板。缓慢落下上层膜,静置至少1 min以使培养基凝固。底部向上36℃分别培养24 h和48 h,对不同培养时间下各平板的菌落进行计数。

1.6 数据处理

试验数据利用Excel软件进行初步整理。应用SPSS软件中的方差分析法对Peelplate 3M测试片法和国标法的菌落总数测定结果进行比较,同时比较Peelplate 3M测试片法中样品培养24 h和48 h的菌落总数测定结果。

2 结果与分析

2.1 呼伦贝尔市生鲜乳样品中菌落总数不同检测方法的测定结果比较

从表1可以看出,国标法检测结果为0.08万个CFU/mL~26.5万个CFU/mL,平均值为4.51万个 CFU/mL;Peelplate 3M测试片法检测结果为0.03万个CFU/mL~16.0万个CFU/mL,平均值为2.67万个CFU/mL;方差分析结果表明,2种方法的检测结果差异不显著(P>0.05)。

2.2 通辽市生鲜乳样品中菌落总数不同检测方法的测定结果比较

从表2可以看出,国标法检测结果为0.05万个CFU/mL~91.0万个CFU/mL,平均值为4.67万个 CFU/mL;Peelplate 3M测试片法检测结果为0.05万个CFU/mL~95.0万个CFU/mL,平均值为4.74万个CFU/mL;方差分析结果表明,2种方法的检测结果差异不显著(P>0.05)。

2.3 呼和浩特市生鲜乳样品中菌落总数不同检测方法的测定结果比较

表3 呼和浩特市生鲜乳样品中菌落总数不同检测方法的测定结果分析 份,万个CFU/mL

表4 测试片法不同培养时间牛奶中菌落总数测定结果分析 份,万个CFU/mL

从表3可以看出,国标法检测结果为0.21万个CFU/mL~2.5万个CFU/mL,平均值为1.03万个CFU/mL;Peelplate 3M测试片法检测结果为0.07万个CFU/mL~4.2万个CFU/mL,平均值为0.78万个CFU/mL;方差分析结果表明,2种方法的检测结果差异不显著(P>0.05)。

2.4 Peelplate 3M测试片法不同培养时间牛奶中菌落总数测定结果比较

从表4可以看出,Peelplate 3M测试片法样品培养24 h时,菌落总数测定结果为0.35万个CFU/mL~183.0万个 CFU/mL,平均值为102.99万个CFU/mL;培养48 h时,菌落总数测定结果为0.30万个CFU/mL~188.0万个CFU/mL,平均值为115.12万个CFU/mL;方差分析结果表明,样品培养24 h和48 h测定结果差异不显著(P>0.05)。

3 讨论

从呼伦贝尔市、通辽市、呼和浩特市共102批次奶罐生鲜乳样品菌落总数检测结果来看:中东部地区生鲜乳的菌落总数平均值为0.78万个CFU/mL~4.74万个CFU/mL,小于美国和欧盟平均水平(10万个/mL),达到了我国优质乳菌落总数的标准(10 万个/mL)。 许振伟等[2]研究报道,上海地区生鲜乳菌落总数为0.011万个CFU/mL~110万个CFU/mL,而该研究中测定结果的最大平均值为4.74万个CFU/mL,低于上海地区;达列亚·阿合买提[3]研究报道,乌鲁木齐地区生鲜乳中菌落总数为0.1万个CFU/mL~160万个CFU/mL,最大值也高于该研究结果的最大平均值;比尔来西肯·赛都力等[4]的研究结果表明,伊宁地区生鲜乳中菌落总数为23万个CFU/mL~64万个CFU/mL,最大值也高于该研究结果;黑龙江省兽药饲料监察所2011年发布的检测报告表明,黑龙江地区运输车生鲜乳中菌落总数为0.36万个CFU/mL~460万个CFU/mL[5],最大值也高于该研究结果。综上提示,内蒙古中东部地区生鲜乳卫生状况良好。

该研究结果表明,生鲜乳菌落总数检测国标法和Peelplate 3M测试片法的菌落总数测定结果差异不显著(P>0.05)。国标法操作烦琐、费时,测试片法检出率高,操作简便,占用空间小,特别适用于实验空间较小的实验室及野外操作。以采集的45份乳头奶稀释液为样本,对培养24 h和48 h后的测定结果进行比较,方差分析结果表明,2个培养时间的测定结果差异不显著(P>0.05),提示在使用Peelplate 3M测试片法时,培养24 h即可对样品进行菌落计数。

4 结论

内蒙古中东部地区生鲜乳中细菌污染风险小;国标法和Peelplate 3M测试片法测定生鲜乳中菌落总数结果没有显著性差异,建议实践生产中推广应用测试片法;应用Peelplate 3M测试片法测定生鲜乳中菌落总数时,样品培养24 h即可获得可靠的测定结果。

参考文献:

[1]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定:GB 4789.2—2016[S].北京:中国标准出版社,2016.

[2]许振伟,韩奕奕,郑小平,等.生鲜乳中硫氰酸钠和菌落总数的风险评估研究[J].中国畜牧兽医,2013,40(S1):18-22.

[3]达列亚·阿合买提.新疆生鲜乳菌落总数和部分理化指标检测[J].中国畜牧兽医文摘,2013,29(10):52-53.

[4]比尔来西肯·赛都力,王一明,阿曼土尔,等.伊宁市区生鲜牛乳中微生物污染程度检测与分析[J].黑龙江畜牧兽医,2014(13):209-211.

[5]黑龙江省兽药饲料监察所.2011年黑龙江省生鲜乳中菌落总数监测情况[J].黑龙江畜牧兽医,2011(12):53-54.

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