王彩步，段宝忠

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.为百合科黄精属多年生草本植物，药用其根茎，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功能〔1〕。滇黄精为中国药典黄精基原植物之一，主产于云南，习称“大黄精”，其质量较佳〔2〕，是云南重要的道地药材〔3-4〕。现代药理研究表明其在降血糖〔5〕、抗 HIV〔6〕、抗氧化〔7〕等方面具有显著活性，其中黄精多糖是其主要活性成分，为药典质量控制指标。云南作为滇黄精的道地产区〔8〕，滇黄精产量大，具有显著资源优势和巨大开发潜能〔9〕。近年来，随着滇黄精野生资源日渐枯竭，人工种植已成为其主要来源〔10〕，云南省滇黄精种植基地规模日益扩增。目前，对滇黄精研究已有多方面的文献报道〔11-12〕，但针对云南不同种植基地的滇黄精质量评价鲜见报道。鉴于此，本文对云南省11个不同种植基地的滇黄精多糖含量进行了测定评价，以期为云南人工种植滇黄精药材质量提供一定参考。

1 仪器和材料

1.1 仪器UV-5500紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；HH-S2S数显恒温水浴锅（上海晖创化学仪器有限公司）；GH-252电子天平（日本AND）；AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；FY135型中草药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；Millipore纯水处理系统等。

1.2 材料滇黄精样品于2017年采收期采自云南省不同种植基地。样品经大理大学段宝忠副教授鉴定为百合科植物滇黄精P.kingianum Coll.et Hemsl.的根茎，样品洗净切片后先自然干燥，再经60℃恒温干燥至恒重。D-无水葡萄糖对照品购于中国食品药品检定研究院（批号110833-201506，纯度＞98%）；苯酚、硫酸、乙醇等试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每l mL中含无水葡萄糖0.33 mg）。

2.2 供试品溶液制备取60℃干燥至恒重的滇黄精细粉约0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10 mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.3 苯酚溶液的制备精密称取苯酚2 g，加少量蒸馏水溶解，转移至100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，摇匀备用。

3 结果与讨论

3.1 参比波长的选择本研究在400～700 nm波长范围内以空白溶剂为参比进行扫描，扫描结果显示对照品溶液和供试品溶液均在487 nm处有最大吸收波长，故本实验选定487 nm为测定波长。见图1。

图1 对照品溶液（A）和滇黄精多糖溶液（B）扫描图

3.2 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至1.0 mL，摇匀，在冰水浴中准确缓缓滴加1 mL 2%苯酚溶液，再迅速滴加5 mL浓硫酸溶液，混匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法（中国药典附录，通则0401），在487 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A=28.94C+0.07（r=0.999 3）。样品检测量在0.004 7～0.026 8 mg∕mL范围内与吸光度线性良好。

3.3 精密度试验精密称取S7样品0.25 g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，同法连续测定6次，计算含量，RSD分别为0.24%和0.28%，表明仪器精密度良好。

3.4 稳定性试验精密称取S7样品0.25 g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，然后分别于0、10、30、50、70、90、120 min，同法测定，计算含量，RSD为1.26%，表明供试品溶液在2 h内稳定。

3.5 重复性试验取S7号样品，精密称定6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，同法测定。计算含量，RSD为0.85%，表明方法重复性良好。

3.6 加样回收率试验精密称取S7样品0.25 g，共6份，精密加入葡萄糖对照品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，计算含量，结果表明加样回收率值分别为98.6%、100.3%、98.2%、99.7%、101.3%、99.4%，平均回收率为99.7%，RSD为1.26%，符合分析要求。

3.7 样品含量测定精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至1.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg），计算，即得结果。见表1。

表1 不同种植基地滇黄精中黄精多糖含量测定

4 结论

目前植物多糖含量测定的方法主要有HPLC法〔12〕、苯酚-硫酸法〔13〕、蒽酮-硫酸法〔14〕和 3，5-二硝基水杨酸（简称DNS）法〔15〕气相色谱法〔16〕等。由于多糖在强酸作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛，糠醛与酚性物质如苯酚缩合形成有色化合物，反应迅速、安全，有色物质稳定〔17〕。本研究使用D-无水葡萄糖作为对照品，采用苯酚-硫酸显色法，建立了滇黄精总多糖含量测定的方法，结果显示有色物生成量与黄精多糖浓度存在良好的线性关系。波长扫描筛选结果显示487 nm为滇黄精多糖含量测定最佳波长。本研究结果显示本法操作简便，稳定性好，灵敏度高，可用于滇黄精中多糖含量的测定。

对云南省不同种植基地的滇黄精中黄精多糖含量的测定结果显示，11批样品中，除S4号样本中多糖含量未达到《中国药典》（2015年版）的含量要求（7%），可能与该药材部位较为幼嫩有关，具体原因有待进一步扩大样本采集寻找相关因素。其余10批滇黄精药材，黄精多糖含量均符合要求，其中S7、S8、S9、S11等4批样本含量较高，在12.48%～14.28之间。本研究表明人工种植的滇黄精药材质量整体较优。当前滇黄精的资源需求量较大，随着野生资源的不断枯竭，人工种植是解决滇黄精资源紧缺的可行措施。滇黄精为典型的喜荫植物，云南有大量的林地资源可供利用，可在适生区大力发展滇黄精种植，建立滇黄精GAP基地，这不仅能够解决滇黄精药材紧缺的情况，对保护和利用滇黄精野生资源都具有重要意义。

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