国 超，赖 泳

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

美洲大蠊（Periplaneta americana），俗称“蟑螂”，属蜚蠊目蜚蠊科大蠊属，当代药理学及临床研究显示其具有较好的抗肿瘤、修复破损黏膜、保护心肌细胞、增强免疫力及抗炎作用〔1-6〕，美洲大蠊提取物在体外具有抗氧化能力，然而，其在体内的抗氧化效果却未见报道〔7〕。本实验研究了美洲大蠊醇提物体内的抗疲劳、抗缺氧作用，旨在为研究美洲大蠊的药理作用机制提供资料，为美洲大蠊的食用和药用价值的开发提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物SPF级昆明种小鼠240只，雌雄各半，体重（20±2）g，昆明医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（湘）2013-0004。

1.2 主要试剂及实验器材美洲大蠊提取物由大理大学何正春老师提供，美洲大蠊购自弥渡县美洲大蠊养殖中心。取美洲大蠊药材粉末，用乙醇、水依次加热回流提取2次，每次2 h，滤过，回收溶剂，浓缩，得乙醇提取物（美洲大蠊提取物Ⅱ）、水提取物（美洲大蠊提取物Ⅰ），实验前用生理盐水将醇提物配成所需浓度。实验所用测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。MTX-150低温高速离心机（TOMY，日本）；电热三用水箱（北京医疗设备厂有限责任公司）；756 MC紫外可见分光光度计；电子天平（sartorius德国）；恒温水浴槽；玻璃游泳箱（50 cm×50 cm×40 cm，自制）。

1.3 美洲大蠊醇提物对小鼠耐常压缺氧试验取l8～22 g小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，其中3组分别灌服高剂量［80 mg∕（kg·d）］、中剂量［40 mg∕（kg·d）］、低剂量［20 mg∕（kg·d）］的美洲大蠊醇提物的生理盐水溶液；空白对照组灌服同体积的生理盐水；阳性对照组选用心得安（盐酸普萘洛尔）作为阳性药〔8〕。1 次∕d，持续14 d，末次给药30 min后，将小鼠放入盛有10 g钠石灰的125 mL广口瓶中（瓶口涂有凡士林），加盖密封，以无呼吸（小鼠胸部不起伏）为指标，记录小鼠存活时长〔9〕。

1.4 美洲大蠊醇提物对小鼠的力竭游泳试验取l8～22 g小鼠50只，雌雄各半，分组同“1.3”项。1 次∕d，持续14 d，末次给药30 min后，将小鼠置入（30±1）℃、50 cm×50 cm×40 cm玻璃缸内，记录各小鼠自入水开始到力竭（小鼠头部沉入水中10 s无法浮出水面）溺死的时长。

1.5 美洲大蠊醇提物对正常小鼠免疫器官指数的影响取l8～22g小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，其中3组分别灌服高剂量［80 mg∕（kg·d）］、中剂量［40 mg∕（kg·d）］、低剂量［20 mg∕（kg·d）］的美洲大蠊醇提物的生理盐水溶液；空白对照组灌服同体积的生理盐水；阳性对照灌服同体积左旋咪唑［50 mg∕（kg·d）］的生理盐水。1次∕d，持续14 d。胸腺指数、脾脏指数的计算方法为不同分组小鼠试验结束后小鼠称重，然后剖取胸腺、脾脏，用天平称湿重并计算脏器指数。

1.6 美洲大蠊醇提物对小鼠碳粒廓清指数K及吞噬指数（校正）α的影响取l8～22 g小鼠50只，雌雄各半，分组同“1.5”项。1次∕d，持续14 d。末次给药后1 h，取印度墨汁，反复振动至摇匀，用1%明胶液稀释4倍。于鼠尾静脉注入稀释的墨汁0.01 mL∕g。注入墨汁后30 s及6 min用取血吸管从小鼠眼内眦静脉丛取血0.025 mL，立刻吹入0.1%碳酸钠（Na2CO3）溶液2 mL中，并反复吸入、吹出，充分洗出吸管壁附着的血液，校零，于756分光光度计上675 nm处比色〔10〕，按下式计算吞噬指数K及吞噬系数α：K=（1gC1-lgC2）∕（T2-T1）；α=W*K1∕3∕WLS。公式中C为血中碳粒浓度，T为时间，W为体质量，WLS为肝、脾质量之和。

1.7 统计学方法数据分析采用SPSS 19.0统计软件，计量资料以均数±标准差（± s）表示，用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 美洲大蠊醇提物对小鼠耐常压缺氧实验与空白对照组相比，通过连续14 d的不同剂量美洲大蠊醇提物的服用，各组小鼠耐常压缺氧存活时间明显延长，尤以中、高剂量组延长较为显著（P＜0.05）。见表1。

表1 美洲大蠊醇提物对小鼠耐常压缺氧存活时间的影响（±s，n=10）

表1 美洲大蠊醇提物对小鼠耐常压缺氧存活时间的影响（±s，n=10）

注：与空白对照组比较*P＜0.05；与阳性对照组比较#P＜0.05。

组别 剂量∕（mg∕kg） 延长率∕%—13.40 0.50 16.70 33.03空白对照组普萘洛尔组美洲大蠊低剂量组美洲大蠊中剂量组美洲大蠊高剂量组— 7 2 0 40 80存活时间∕min 37.62±4.3 42.64±3.7*37.81±4.4 43.88±4.9*50.02±4.2*#

2.2 美洲大蠊醇提物对小鼠游泳能力的影响与空白对照组相比，通过连续l4 d的不同剂量美洲大蠊醇提物的服用，各组的游泳时间明显延长，LDH活性升高，尤以中、高剂量组提高更为显著（P＜0.05）。见表2。

表2 美洲大蠊醇提物对小鼠游泳时间及耐力运动小鼠LDH活性的影响（±s，n=10）

表2 美洲大蠊醇提物对小鼠游泳时间及耐力运动小鼠LDH活性的影响（±s，n=10）

注：与空白对照组比较*P＜0.05；与阳性对照组比较#P＜0.05。

LDH∕（U∕10 mL）3.31±0.42 4.18±0.33 3.56±0.12 4.42±0.18*4.93±0.09*#组别空白对照组普萘洛尔组美洲大蠊低剂量组美洲大蠊中剂量组美洲大蠊高剂量组剂量∕（mg∕kg）— 7 2 0 40 80游泳时间∕min 298.35±105.26 357.89±92.15*306.64±98.59 399.36±88.57*#420.75±102.46*#

2.3 美洲大蠊醇提物对小鼠胸腺指数、脾脏指数的影响美洲大蠊醇提物高、中、低剂量组小鼠的胸腺指数、脾脏指数均高于空白对照组（P＜0.05）。见表3。

表3 美洲大蠊对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响（±s，n=10）

表3 美洲大蠊对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响（±s，n=10）

注：与空白对照组比较*P＜0.05，与空白对照组比较△P＜0.01；与阳性对照组比较#P＜0.05。

胸腺指数∕（mg∕10 g）12.43±1.13 22.61±.2.09*15.85±2.37 21.63±1.45*28.37±2.90*△#组别空白对照组左旋咪唑组美洲大蠊低剂量组美洲大蠊中剂量组美洲大蠊高剂量组剂量∕（mg∕kg）—50 20 40 80脾脏指数∕（mg∕10 g）25.72±3.46 35.75±7.65*30.34±7.52 33.32±9.68*42.47±9.77*#

2.4 美洲大蠊醇提物对小鼠碳粒廓清指数K及吞噬指数（校正）α的影响与空白对照组相比，通过连续l4 d的不同剂量美洲大蠊醇提物的服用，各组小鼠碳粒廓清指数和吞噬指数均增大，尤以中、高剂量组增大较为显著（P＜0.05）。见表4。

表4 美洲大蠊对小鼠碳粒廓清指数K及吞噬指数（校正）α的影响（±s，n=10）

表4 美洲大蠊对小鼠碳粒廓清指数K及吞噬指数（校正）α的影响（±s，n=10）

注：与空白对照组比较*P＜0.05，与空白对照组比较△P＜0.01；与阳性对照组比较#P＜0.05。

吞噬指数（校正）α 4.823±0.859 17.637±3.059*5.538±1.453 9.893土1.933*24.743±2.564*△#组别空白对照组左旋咪唑组美洲大蠊低剂量组美洲大蠊中剂量组美洲大蠊高剂量组剂量∕（mg∕kg）—100 20 40 80碳粒廓清指数K 0.044±0.016 0.064±0.025*0.046±0.016 0.057±0.039*0.081±0.011*#

3 讨论

美洲大蠊具有抗肝炎、抗肿瘤、抗菌、抗HIV病毒、提升机体免疫力、消炎镇痛、促进血管增生、组织修复等作用〔10-14〕。疲劳是机体的一种复杂生理化学变化过程，它既标志着机体原有工作能力的暂时下降，又是机体发展到疾病状态的一个征兆。若疲劳得不到及时缓解将会逐渐积累，最终导致过度疲劳，使机体发生内分泌紊乱、免疫力下降，甚至出现器质性病变。运动耐力的提高是抗疲劳能力增强的直接体现〔15〕。本实验研究发现，美洲大蠊能够显著延长小鼠游泳时间产生抗疲劳作用。与空白对照组比较发现，美洲大蠊给药组能明显延长小鼠游泳时间，中剂量组与高剂量组和空白组比较差异有统计学意义，与阳性对照组比较高剂量组延长游泳时间有显著差异。说明美洲大蠊醇提物能提升小鼠抗疲劳能力。

缺氧对机体是一种厉性刺激，影响机体代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心脑等重要器官缺氧、缺少供能，最后死亡〔16〕。此外，小鼠断头后，因为供血终止，在短期内脑中原有的血液和营养物质尚能使脑功能维持短时间，小鼠显示出有规律地张口喘气，以喘气时间为指标可观察药物对脑缺血的保护作用〔17〕。在常压耐缺氧实验中，与空白对照组比较，美洲大蠊中剂量组和高剂量组能显著延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间；与阳性对照组比较显示，高剂量给药组能显著延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间。凡能使脑耗氧减少的药物均能延长小鼠喘气时间。本实验中美洲大蠊醇提物能延长小鼠断头张口喘息时长。

碳粒廓清指数表示在一定范围内，小鼠对进入机体碳粒的清除速率，是非特异性免疫功能的指标〔18〕。胸腺指数和脾脏指数也作为评价小鼠免疫力的重要指标。本实验对小鼠给药后的脏器指数和碳粒清除率进行了检测。实验表明各治疗组吞噬指数K及吞噬系数α均增高（P＜0.05），中剂量组和高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义，高剂量组与阳性对照组比较差异有统计学意义，说明均能增强造模小鼠网状内皮系统的吞噬功能，提示美洲大蠊能刺激免疫器官的细胞增生，使免疫器官指数升高，从而提高机体的免疫功能。不同剂量美洲大蠊给药组小鼠的胸腺指数和脾指数也高于空白对照组，中剂量组和高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义，高剂量组与阳性对照组比较差异有统计学意义。提示美洲大蠊醇提物可以通过提升细胞免疫功能、增加免疫器官的质量等提高机体的免疫功能。

综上所述，小鼠灌服美洲大蠊醇提物后提高了小鼠机体内环境对氧代谢过程的调节机能，从而加强了小鼠的低氧游泳耐力，在一定浓度范围内呈剂量依赖性，显著改善小鼠抗疲劳作用，同时也增强了机体的免疫能力，由此认为美洲大蠊具有广阔的应用前景。

［参考文献］

〔1〕吴道勋，邵维莉，常旭，等.美洲大蠊提取物对H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞的影响〔J〕.大理大学学报，2017，2（8）：1-5.

〔2〕陈俊雅，耿玲，吴道勋，等.美洲大蠊提取物联合环磷酰胺对H22荷瘤小鼠的作用〔J〕.中国实验方剂学杂志，2015，21（23）：130-134.

〔3〕牛春丽，曾菁，夏盟恺，等.肝龙胶囊及美洲大蠊脱脂膏对小鼠急性结肠炎的影响〔J〕.大理学院学报，2015，14（4）：12-16.

〔4〕陆丽，张旭强，甘平，等.美洲大蠊提取物对ISO致大鼠心肌缺血的保护作用〔J〕.大理学院学报，2014，13（8）：7-10.

〔5〕李娇，张冰清，刘光明，等.美洲大蠊脱脂膏对小鼠免疫功能的影响〔J〕.大理大学学报，2015，14（10）：1-5.

〔6〕陈俊雅，李洪文，吴道勋，等.美洲大蠊提取物CⅡ-3抗炎作用及机制研究〔J〕.大理学院学报，2015，14（2）：8-11.

〔7〕焦春香，张成桂，刘光明，等.美洲大蠊提取物中抗衰老活性部位抗氧化活性的初步分析〔J〕.时珍国医国药，2011，22（6）：1389-1391.

〔8〕于蕾妍，邹本革，周颖，等.螺旋藻复合多糖与银杏提取物对小鼠耐缺氧能力的影响〔J〕.动物医学进展，2017，38（4）：72-74.

〔9〕张爽，蔡璐，潘雪，等.复方人参合剂对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响〔J〕.人参研究，2015，27（2）：8-10.

〔10〕李仪奎.中药药理实验方法学〔M〕.2版.上海：上海科学技术出版社，2006：721-728.

〔11〕胡艳芬，吕小满，刘光明，等.美洲大蠊提取物对3株人肺癌细胞的体外抑制作用〔J〕.大理学院学报，2009，8（12）：1-3.

〔12〕何正春，胡明辉，王晓雨，等.美洲大蠊提取物对3株人及小鼠白血病细胞的细胞毒性研究〔J〕.云南中医中药杂志，2009，30（5）：56-57.

〔13〕焦春香，刘光明，周萍.天然药物康复新的研究进展〔J〕.时珍国医国药，2008，19（11）：2623-2624.

〔14〕戴云，曾茗，项朋志.蜚蠊的药用价值〔J〕.中药材，2005，28（9）：848-850.

〔15〕金晓玲，杜红岩，李钦.杜仲雄花茶对小鼠抗疲劳作用的研究〔J〕.食品科学，2008，29（7）：432-434.

〔16〕唐玉琴，淮文英，王艳秋，等.表观遗传缺氧作用机制的新研究〔J〕.当代医学，2017，23（15）：189-192.

〔17〕韦坤璇，邓之婧，甘露，等.二氢杨梅素对小鼠急性脑缺血缺氧的保护作用〔J〕.广西医科大学学报，2017，34（3）：347-350.

〔18〕杨奕樱，潘春，张秋方，等.双白半水提浸膏对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响〔J〕.河南中医，2017，37（7）：1190-1192.