邱　巍，胡　威，赵建江，陈素梅，刘东声

(宿迁市人民医院检验科，江苏宿迁　223800)

1　材料和方法

1.1研究对象血液样本来源于2016年1月～2017年12月在江苏省宿迁市人民医院肿瘤科接受治疗的食管癌患者246例，其中男性177例，女性69例，平均年龄68.14±8.91岁。对照组为健康体检者样本240例，其中男性158例，女性82例，平均年龄58.51±7.94岁，排除肿瘤及其他全身性疾病。样本均来自江苏宿迁地区汉族人群。本研究由宿迁市人民医院医学伦理委员会批准，参与人员知情同意。

1.2试剂与仪器TIANamp Blood DNA Kit全血基因组提取试剂盒(北京天根生化公司)， TaKaRa Ex Taq PCR试剂盒、内切酶和引物(大连宝生物公司)。T100 PCR仪(美国伯乐公司)，FR980A生物电泳图像分析系统(上海复日科技公司)，DYY-8C电泳仪(北京六一仪器厂)，Centrifuge 5424R离心机(德国Eppendorf公司)。

1.3方法

1.3.1基因组DNA提取：采用TIANamp Blood DNA Kit提取所有样本的全血基因组DNA，使用紫外分光光度计检测全血基因组DNA的质量。

1.3.2基因多态性分析：-149C>T和-579G>T位点的基因型运用PCR-RFLP法检测。-149C>T上游引物为5’-TGCTGTGACAGGCAGAGCAG-3’，下游引物为5’-GGTAGCCGGGAACTCCACGG-3’。-579G>T上游引物为5’-GAGGTCTCATTATGCCTAGG-3’，下游引物为5’-GGGAGCTCACCTTCTAGAAA-3’。PCR反应体系见参考文献[2，3]。-149C>T扩增产物采用TAKARA Blnt I酶切试剂盒体系进行限制性酶切，-579G>T扩增产物使用TAKARA Pvu II酶切试剂盒体系进行限制性酶切。

1.4统计学分析对食管癌组和对照组进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验，用SPSS 22.0软件进行统计学分析，用卡方检验进行各基因型频率的比较，Logistic回归模型计算比值比(odds ratio，OR)和95%可信区间(confidence intervals，CI)，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1基因分型结果-149C>T PCR扩增产物为380 bp，基因型CT可被Blnt I部分切开，见380，207和173 bp三个片段，基因型TT可被完全切开，见207和173 bp两个片段，见图1。

1：MarkerⅠ；2，3：TT型.207 bp/173 bp；4，5：CT型.380 bp/207 bp/173 bp；6：PCR产物.380 bp。

图1DNMT3B -149C>T扩增产物电泳图

-579G>T PCR扩增产物为225 bp，基因型GT可被Pvu II部分切开，见225，132和93 bp三个片段，基因型TT可被完全切开，见132和93 bp两个片段，基因型GG不能被切开，见225 bp片段，见图2。