陈超　杨炼红

炎症反应是中枢神经系统疾病的一个病理过程,小胶质细胞是其主要的免疫监视细胞。小胶质细胞的过度活化,使特定的炎症因子增多,从而导致中枢神经系统疾病[1-2]。免疫异常是中枢神经系统疾病的主要原因之一。脂多糖(Lipopolysacchairde,LPS)是革兰氏阴性细菌的细胞壁成分之一,是常用的小胶质细胞激活剂。当小胶质细胞被脂多糖激活后将释放大量的炎症介质,如白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),从而导致中枢神经系统疾病的发生[3-4]。因此,抑制小胶质细胞的活化,减少炎症因子的分泌,将成为治疗中枢神经系统炎症性疾病的一种方法。正常条件下,Toll样受体(TLRs)在脑细胞内表达量很低,当在细胞受到损伤时TLRs表达迅速增加,并作用于下游信号分子,使编码炎症的相关分子及细胞因子的基因转录[5-6]。其中TLR4在小胶质细胞的激活及炎症诱导中起重要作用。TAK-242是TLR4受体的特异性抑制剂[7]。本实验通过脂多糖处理BV2细胞构建炎症细胞模型,并使用TAK-242预处理细胞,观察TLR4信号通路炎症因子的变化。

材料与方法

一、材料

BV2细胞株为本实验室刘军教授所赠、DMEM/F12培养基、胎牛血清、PBS、胰酶、双抗均购自美国Glibco公司;脂多糖购自美国Sigma公司;TAK-242购自美国MCE公司;CCK-8试剂盒购自日本同仁公司;Trizol、逆转录试剂盒Prime Script RT Master Mix和PCR扩增试剂SYBR Premix Ex Taq Ⅱ购于日本Takara公司;引物为华大基因合成,序列如下:TLR4 上游序列：5′-GGCACTGCATGTGACTTTCC-3′；TLR4下游序列：5′-CTCAGACTCGGCACTTAGCA -3′。MyD88上游序列：5′-CTGGCCTGAGCAACT AGGAC-3′；MyD88下游序列：5′-CGAGGAGGCATG TGTGTACT-3′。IL-1β上游序列：5′-AGAGCCCAT CCTCTGTGACT-3′；IL-1β下游序列：5′-GGAGCCT GTAGTGCAGTTGT-3′。IL-6上游序列：5′-CTGGT CTTCTGGAGTACCATAGC-3′；IL-6下游序列：5′-TGTGACTCCAGCTTATCTCTTGG-3′。内参β-actin上游序列：5′-TGAGCGCAAGTACTCTGTGTG-3′；内参β-actin下游序列：5′-CAGCTCAGTAACAGTCCGC CTA-3′。

二、BV2细胞的培养方法