董颖 胡红霞 田照辉 王巍 东天

（北京市水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心 渔业生物技术北京市重点实验室，北京 100068）

淋巴细胞体外增殖性反应是衡量机体细胞免疫能力的一个重要测定指标，对研究免疫机理、诊断及药物选择方面具有重要作用［1］。分离获得有活力的淋巴细胞是进行此项研究的先决条件。不同物种淋巴细胞的增殖条件不尽相同，影响淋巴细胞增殖的主要因素有细胞培养时间、培养温度、细胞培养初始密度、胎牛血清浓度及丝裂原的种类和浓度等。目前，关于鲟鱼外周血淋巴细胞的分离和体外增殖条件的研究尚未见报道。

本研究探索了不同浓度Percoll分离液对鲟鱼外周血淋巴细胞的分离效果。分别以植物血凝 素（Phytohaemagglutinin，PHA）、 刀 豆 蛋 白 A（Concanavalin A，ConA）和脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）作为淋巴细胞增殖丝裂原，采用L25（56）五因素五水平正交试验设计［2］，用Cell Counting Kit-8法（CCK-8或WST-8）对鲟鱼外周血淋巴细胞的培养时间、培养温度、细胞密度、胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS）浓度及丝裂原浓度等因素进行探索性研究，以探讨鲟鱼外周血淋巴细胞增殖性反应的最佳条件，为进行鲟鱼免疫功能的检测及染色体分析等研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

健康的小体鲟（Acipenser ruthenus），由北京市水产科学研究所房山十渡国家级鲟鱼良种场提供。

1.2 方法

1.2.1 鲟鱼外周血淋巴细胞的分离 用无菌注射器吸取1%灭菌肝素钠溶液，实验鱼尾部消毒后，尾静脉抽血（血液∶肝素钠溶液=1∶1），将注射器针头灼烧灭菌后，套上针帽，颠倒混匀。分别取……