邓超 杜秀娟 黄涛 郭英 李炳学 卜宁

（1. 沈阳师范大学生命科学学院，沈阳 110034；2. 沈阳农业大学土地与环境学院，沈阳 110866）

生物固氮是自然生态系统中氮的主要来源，陆地生态系统中通过生物固氮输入的氮约110 Tg/a，对全球生态系统氮素循环平衡起着关键作用［1］。固氮菌在自然界分布十分广泛，可固定空气中的游离氮转变为生物可以利用的氮元素，固氮反应是地球上氮素的重要来源。有些固氮菌分泌一些植物激素，促进植物根系生长和对水分及矿物质的吸收［2-4］。过量氮肥的施用抑制土壤中固氮菌的固氮作用，减弱了固氮菌的氮素营养竞争优势，固氮种群呈下降趋势。在减施氮肥的国家调控战略条件下，利用固氮菌资源保持玉米稳产增产成为重要途径。本研究以沈阳农业大学棕壤长期定位试验站玉米栽培土壤为样品来源，分离目标固氮菌。

固氮菌为保障固氮酶在低氧条件发挥作用，经常依靠分泌胞外多糖控制进入细胞的氧浓度。胞外多糖还有助于固氮菌抵抗营养、干燥、不良环境等胁迫，有利于菌体定值在植物根部，所以本研究将高产胞外多糖作为筛选固氮菌的一个重要指标，以期达到获得利于固氮菌体，使减施氮肥土壤补充保持玉米等作物稳产高产需求的目的。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 供试土壤采集于沈阳农业大学棕壤长期定位试验站（北纬40°48'，东经123°33'）。1.1.2 培养基 阿须贝（Ashby）培养基：KH2PO4（0.2g），NaCl（0.2g），CaCO3（5.0g），CaSO4·2H2O（0.1g），MgSO4·7H20（0.2g），葡萄糖（10.0g），琼脂粉（20.0g）溶于1 000 mL蒸馏水中，pH7.2。LB培养基：酵母浸粉5.0 g，NaCl 10.0 g，蛋白胨 10.0 g，琼脂粉20.0 g，溶于1 000 mL蒸馏水中，pH7.0。……