王永 兰青阔 赵新 陈锐 沈晓玲 李文 张耀中 李亮 王勤英

（1. 河北农业大学植物保护学院，河北 保定 071001；2. 天津市农业质量标准与检测技术研究所，天津 300381；3. 天津农学院，天津 300382；4. 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081）

截止到2015年，全球共有40个国家批准转基因作物用于粮食或饲料，涉及26种转基因作物的363个转基因转化事件［1］，累计种植面积达20亿hm2。伴随转基因技术的发展和人们生活水平的提高，转基因作物及其衍生食品的安全问题受到社会强烈关注和争议［2-3］。世界各个国家、组织和地区，都对转基因作物的上市和推广规定了明确的政策和法规［2，4］，对其开展严格的生物安全评价。

表达载体、目的基因整合情况、外源插入序列表达情况等分子特征是转基因生物安全评价的重要内容，其中转基因作物中插入外源基因的拷贝数鉴定是关键参数［5］。以往的拷贝数检测方法有Southern 杂交［6］、实时荧光 PCR［7-9］、普通 PCR 方法［10］等，但在实验步骤、标准物质要求等方面存在一定的局限性。微流滴数字PCR是新一代PCR技术，其原理是将PCR体系通过微流滴的形式分配成20 000甚至更多个微滴，经PCR扩增后进行信号阅读获得阳性微滴和阴性微滴的数量，再经过泊松分布的计算原理获得样品中靶标基因浓度。本研究应用微流滴数字PCR方法鉴定转基因水稻目的基因拷贝数，并与Southern杂交结果进行比较，以探讨微流滴数字PCR技术在转基因作物目的基因拷贝数的应用性。

1 材料与方法

1.1 材料

转Cry1Ab基因抗虫转基因水稻及其非转基因受体由本实验室保存。……