刘苗苗 南岩东 陈艳丽 谢永宏 金发光

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，约占全球恶性肿瘤死亡率的20%[1-3]。肺癌的早期发现，早期诊断，以及早期治疗对提高肺癌患者的生存率显得尤为重要。目前肺癌的早期筛查主要有高分辨率CT成像、血液或组织中小分子RNA和血液标本肿瘤标志物和自身抗体的检测[4-6]。既往研究表明，肿瘤标志物对肺癌的早期筛查敏感性较低，临床意义不大，主要用于化疗的效果监测，而自身抗体对于肺癌的早期筛查具有较好的评估准确度[7-8]。本研究主要探讨P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE 7项自身抗体单项及联合检测在临床中的诊断价值，进一步分析其与肺癌患者临床病理特征的相关性，为联合不同自身抗体检测在肺癌早期诊断中提供临床参考依据。

对象和方法

一、研究对象

收集我院呼吸内科2016年1月至2017年1月就诊的肺癌患者114例，其中男性患者78例，女性患者36例，中位年龄62岁。其中肺癌病理类型和临床分期诊断明确的患者共65例，腺癌(adenocarcinoma)38例，鳞癌(squamous cell carcinoma)17例，小细胞肺癌(small cell carcinoma)10例；TNM分期分为Ⅰ期7例，Ⅱ期5例，Ⅲ期12例，Ⅳ期41例。收集同期就诊的194例肺部良性病变(支气管结核、肺结核、肺炎、慢性阻塞性肺疾病等)患者入选为非肺癌组，其中男性患者113例，女性患者81例，中位年龄62.5岁。本研究中肺癌的诊断标准依据中国临床肿瘤学会(CSCO)制定的《原发性肺癌诊疗指南 2016.V1》。所有患者均未接受放化疗、靶向药物治疗或手术等治疗。

二、研究方法

研究对象均空腹抽取静脉血10 ml，置于低温离心机中，以离心半径8 cm，3 500 r/min，离心5 min后吸取上层血清，保证在8h内完成相关检测。7项自身抗体酶联免疫(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测试剂盒及其配套试剂盒购自杭州凯保罗公司；Synergy 2 型酶联仪(Bio-Tek公司)。严格按照试剂盒说明书操作检测自身抗体，读取酶联检测仪位于450 nm处的吸光度(A450 nm)值，各自身抗体范围：P53≥13.1 U·ml-1、PGP9.5≥11.1 U·ml-1、SOX2≥10.3 U·ml-1、GAGE7≥14.4 U·ml-1、GBU4-5≥7.0 U·ml-1、MAGE≥11.9 U·ml-1、CAGE≥7.2 U·ml-1记为阳性表达，反则为阴性表达。

三、统计学方法

结 果

一、7项自身抗体在肺癌组与良性病变组中的表达水平

肺癌组患者的P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1和CAGE 7项自身抗体水平均显著高于非肺癌组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

二、 7项自身抗体在肺癌组和良性病变组中的阳性表达率

肺癌组患者的7项自身抗体阳性表达率明显高于非肺癌组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

三、7项自身抗体单项和联合检测对肺癌患者诊断效能评估

以肺癌患者为疾病组，非肺癌患者为对照组，绘制ROC曲线分析7项自身抗体单项和联合检测对肺癌患者的诊断效能。结果显示，自身抗体单项检测灵敏度均低于50%，特异度均高于85%，ROC曲线下面积 AUCROC均高于0.50，提示各自身抗体对肺癌具有诊断价值。其中7项自身抗体中P53的灵敏度为27.19%，为最灵敏的指标，其特异度为88.41%，ROC曲线下面积 AUCROC为0.65，为曲线下面积最大者。7项自身抗体联合检测的灵敏度为57.89%，特异度82.13%和ROC曲线下面积 AUCROC为0.69，见表3。

表1 肺癌组与非肺癌组中7项自身抗体的表达水平

表2 肺癌组与非肺癌组中7项自身抗体的阳性检测率

表3 7项自身抗体单项及联合平行检测诊断效能

四、7项自身抗体在肺癌患者中的临床病理特征关系

在性别、吸烟及病理类型之间均无统计学差异(P>0.05)；在年龄中，自身抗体PGP9.5(χ2=5.574，P=0.018)在肺癌患者中的阳性检测率具有统计学差异；在临床分期中，7项自身抗体中GAGE 7(χ2=14.850，P=0.002)、MAGEA1(χ2=8.720，P=0.033)、CAGE(χ2=9.146，P=0.027)在肺癌患者中的阳性检测率差异具有统计学意义, P53、PGP9.5、SOX2、GBU4-5在肺癌患者中的阳性检测率无统计学差异(P>0.05)，见表4。

表4 7项自身抗体在肺癌患者中的临床病理特征关系

讨 论

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，也是导致两性死亡的主要原因[9]。早期发现和早期治疗被认为是降低死亡率的主要手段，然而对该疾病的筛查及诊断检测方法较少。虽然低剂量螺旋CT(low dose spiral CT, LDCT)已被证实对早期发现肺小结节高度敏感，并可使肺癌死亡率降低20%[10]。然而，LDCT存在一些局限性，包括假阳性率高(高达50%)，反复辐射暴露和经济负担重等限制了其作为筛选程序广泛应用的可能性。因此，有必要开发更有效、无创的肺癌筛查和早期诊断方法。目前血液诊断性检测主要集中在检测肿瘤标志物如CEA、FRT、NSE、CYFRA21-1、CA50、SCC和CA125，其在晚期阶段表现出不断增加的阳性表达，但由于其敏感性和特异性较低，因此很少用作早期生物标志物[11]。然而，肺癌自身抗体是在肿瘤细胞发展的早期产生了基因突变、异位或重组，相关的抗原释放后被免疫系统识别并产生了针对该抗原的抗体[12]。由于免疫系统的敏感性和稳定性，肺癌自身抗体可以先于影像学5年在血液中被检测出并诊断为肺癌。本研究结果提示, 7项血清自身抗体含量及阳性表达率显著高于非肺癌组，提示检测自身抗体表达水平及阳性表达率可区别肺癌与非肺癌患者，具有临床诊断意义，与既往研究报道一致[6,11]。

在7项自身抗体单项及联合检测效能方面，自身抗体单项检测灵敏度均低于50%，特异度均高于85%，ROC曲线下面积 AUCROC均高于0.50，联合检测的灵敏度为57.89%，特异度82.13%和ROC曲线下面积 AUCROC为0.69，其中灵敏度及ROC曲线下面积 AUCROC均高于自身抗体单项检测，然而特异度低于所有自身抗体单项检测，提示联合检测可在肺癌高危人群中作为一项筛查指标，该结论与既往报道一致[12-13]。

7项自身抗体的表达与不同年龄、性别、有无吸烟的肺癌患者无相关性，与既往文献报道一致。Boyle和Chapman 等[14-15]报道P53、CAGE、GBU4-5在非小细胞肺癌与SOX2在小细胞肺癌中灵敏度及特异度均较高，而我们研究显示，肺癌病理类型与自身抗体表达不具有统计学差异，原因可能与所选试剂盒不同、检测方式多样及种族差异等因素相关。关于TNM分期，GAGE7、MAGEA1和CAGE在肺癌临床分期上均有统计学差异，P53、PGP9.5、SOX2和GBU4-5则不具有差异性。GAGE7、MAGEA1和CAGE在Ⅳ期时表达较高，提示该3种自身抗体可能在肺癌早期或者临床症状出现前未升高，故不易被检测到。P53、PGP9.5、SOX2和GBU4-5在早期未见明显升高，而Chapman 等[15]报道P53、GBU4-5在Ⅰ-Ⅱ期非小细胞肺癌中可检测到，因此需要大样本进一步验证TNM分期与自身抗体之间的关系。

总之，我们的研究表明，血清单项或联合自身抗体检测是鉴别肺癌与非肺癌患者有用的生物标志物且自身抗体的联合检测具有更高的检测能力，可作为肺癌的血清学筛查指标及辅助诊断方法，但仍需进一步对7项自身抗体与肺癌患者的临床病理特征之间的关系进行深入研究，为自身抗体在肺癌辅助诊断的临床应用及进一步指导治疗提出更确切的方针。

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