樊长有 张秋月

摘 要：本文为了能够找出怀山药种质资源缓慢生长离体保存方法，分别将B号山药、47号山药及铁棍山药作为试验对象，研究比久（B9）、多效唑（PP333）等植物生长延缓剂，在低温（4℃）、常温（25℃）环境下，试管苗的保存效果。

关键词：植物生长延缓剂;多效唑;比久;怀山药;离体保存

怀山药不仅能药用，也可食用，因而受到社会的普遍喜爱。由于怀山药长时间处于无性繁殖状态，使得其遭受许多病原菌感染，在种质资源的保存方面，有着比较大的隐患与不足。所以，要想将怀山药种质资源较好的保存下来，离体保存实为一个不错的方法。本文以怀山药为研究对象，探讨多效唑、比久等植物生长延缓剂在常温与低温状态下对其保存所具有的影响，找寻更加有效的保存方法。

一、怀山药的药用价值分析

怀山药是一种典型的薯蓣科植物，薯蓣的块茎属于多年生的缠绕本草植物。怀山药不仅能蔬、能粮，还能药，有报道指出，其每百克当中含有1.9g的蛋白质、0.2g的脂肪、12.4g碳水化合物，能够提供56千卡/234千焦的能量。另外，其中还富含有多种矿物元素与维生素，有着比较全面的营养含量。怀山药性平且味甘，归肺、胃、肾经等。传统中医理论指出，怀山药具有益胃补肾、固肾益精、强筋骨、助五脏、聪耳明目、健脾补肺、延年益寿及长志安神等作用，此外，还有补虚赢、化痰涎及止泻痢等功效。

二、怀山药种植的生物学特性

怀山药喜温暖湿润，怕干旱，忌积水，在那些排水良好、土层深厚及肥沃疏松的砂纸壤土上适合种植。怀山药茎叶喜干燥、高温，而不宜霜冻，最合适的生长温度为25～28℃。其块茎非常耐旱，因此，以沙壤土最为合适种植。如果是粘土，块茎根大、茎须多，且形状不正，容易出现分叉及扁头等情况。当种植且出苗后，块茎生长前期需要并不多的水分，以利块茎深入土层与块茎形成，而到了块茎生长盛期，则不可缺水。

三、多效唑和比久对怀山药离体保存的影响

1.资料与方法

（1）材料。所選用的B号山药、47号山药及铁棍山药，均来自某中药材保育中心。而对于比久（B9）、多效唑（PP333）等植物生长延缓剂，纯度均达分析纯级别。（2）方法。切无菌苗，使之成为一个长为1～1.5cm，且带有1个腋芽的节段，在MS上接种，且附带如0.5mg/L、1.0mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L等质量浓度PP333，及1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L等质量浓度B9的培养基上，并将没有B9与PP333附加的培养基作为各自的对照;当PP333组合于NAA、KT时，NAA、KT会将PP333的部分效果抵消掉，提高其适宜浓度，因此，可将其浓度分别设为1.0mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L与10.0mg/L。

将培养基40mL分别加入到各三角瓶当中，并与4个带1个腋芽的节段接种，每种培养基均制作10瓶。全部处理均持续进行3次。常温条件：光强2000lx，光照14h/d，温度为（25±2）℃。当进行低温保存时，首先于常温下，把接种材料持续培养7d，然后再在低温环境下（4℃），即置于展示柜中，在自然光下进行保存。每30d便对其生长情况观察1次，记录存活率。

2.怀山药试管苗离体保存中PP333所产生的影响

（1）常温保存的影响。当处于常温状态下，如果PP333的质量浓度维持在0mg/L时，那么针对各个山药试管苗而言，当其持续保存到120d时，均死亡;而经过PP333处理后，其存活率得到显著提升。经深层次分析得知，试管苗的保存效果密切相关于PP333的质量浓度，并且各基因型山药所需要的适宜质量浓度存在差异。在试验设计的既定框架内，针对B号山药、47号山药即铁棍山药来讲，当组合添加NAA、KT与PP333时，其适宜PP333质量浓度分别为10.0、5.0、2.5mg/L，如果仅添加PP333，那么三种山药的适宜PPP333质量浓度分别是5.0、2.5、1.0mg/L，之所以会出现此情况，可能因为使用NAA与KT后，其将PP333的部分作用抵消掉了。如果质量浓度比较适宜，在常温状态下，持续保存180d后，各种山药在存活率方面，单用PP333相比与组合添加，并没有明显差异。前者依次为80%、75%与75%，而后者依次为75%、80%、70%。

（2）低温保存的影响。如果上述类型的山药有着相同的保存时间，那么相比于高温下的存活率，低温下的明显偏高。在低温条件下，如果试管苗使用了PP333，那么其存活率较对照组明显偏高，并且PP333的质量浓度维持在较低值，对试管苗存活率的提升有利;如果在适宜的PP333质量浓度下，即铁棍山药为5.0mg/L，47号山药为2.5mg/L，B号山药为1.0mg/L时，其试管苗会有最高的存活率，而其质量浓度相比常温使，均偏低，究其原因，可能与PP333与低温同时起作用的结果。当保存至180d时，铁棍山药的最高存活率为100%，47号山药为100%，B号山药为95%，相比于常温保存时的存活率（80%、75%、75%），均明显偏高。由此表明，对于山药试管苗，PP333对其低温保存效果要明显好于常温。

3.B9对怀山药试管苗离体保存所产生的影响

当处于常温状态下，各个对照山药试管苗持续保存120d后，均死亡，而添加B9后，持续保存180d，仍有较大比例的存活。当处于低温状态下，不管是否添加有B9，试管苗在保存周期上均会得到延长。在特定的B9质量浓度下，铁棍山药于低温下保存的最合适质量浓度是5.0mg/L，47号山药为2.0mg/L，而B号为2.0mg/L，相比于常温状态下保存的适宜质量浓度（10.0.5.0.2.0mg/L），均明显偏低，并且在合适质量浓度下，持续保存180d，低温下的存活率依次为55%、45%。40%，相比于常温下的最合适质量浓度存活率（35%、30%、20%），要明显偏高。

四、结语

综上，在低温环境中，各基因型怀山药的保存效果要明显好于常温，相比于B9的保存效果，PP333的更优。针对缓慢生长保存法而言，其能够有效规避因频繁继代所引起的污染或种质变异情况，因而能够切实保障种质的遗传稳定性，最终达到长时间保存植物种质资源的目的。而对于低温保存而言，其乃是保存植物培养物，使其缓慢生长的不错方法。有报道指出，植物不同，或是同一植物但基因型不同，那么其对低温的敏感性也会存在差异。而由本次研究得知，相比于室温下保存，怀山药节段在接种之后，于室温环境下培养7d，后开展低温保存，能使其存活率得到明显提高。

参考文献：

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