潘建　　蒋自培

[摘要] 目的 探討灯盏花素注射液对角膜碱烧伤兔血管内皮功能的影响。 方法 将40例角膜碱烧伤兔分为观察组和对照组。对照组（20眼）采用常规对症治疗。观察组（20眼）在对照组基础上采用灯盏花素注射液治疗。采用Ando计分法评估兔的角膜炎症状态，采用Trousdale计分法评估兔的角膜溃疡状态，检测两组治疗前后血清VEGF、PEDF、NO的水平，记录两组的创面愈合时间，运用裂隙灯显微镜检测两组兔的角膜新生血管数量。 结果 观察组的总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；两组治疗后角膜炎症评分、角膜溃疡评分明显降低（P<0.05）；观察组治疗后的角膜炎症评分、角膜溃疡评分低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；两组治疗后VEGF、NO明显降低，PEDF明显升高（P<0.05）；观察组治疗后VEGF、NO低于对照组，PEDF高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组的创面愈合时间及新生血管数量低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 灯盏花素注射液能显著提高角膜碱烧伤的疗效，调节兔血管内皮功能。

[关键词] 灯盏花素注射液；角膜碱烧伤；血管内皮功能

[中图分类号] R259 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）32-0034-03

Effect of breviscapine injection on vascular endothelial function in rabbits with corneal alkali burn

PAN Jian JIANG Zipei

Department of Ophthalmology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，China

[Abstract] Objective To investigate the effect of breviscapine injection on vascular endothelial function in rabbits with corneal alkali burn. Methods 40 cases of corneal alkali burned rabbits were divided into observation group and control group. The control group（20 eyes） was treated with conventional symptomatic treatment. The observation group（20 eyes）was treated with breviscapine injection based on the treatment of the control group. The corneal inflammatory state of rabbits was evaluated by Ando scoring method. The corneal ulcer status of rabbits was evaluated by Trousdale scoring method. The levels of serum VEGF， PEDF and NO before and after treatment were measured. The wound healing time of the two groups was recorded and the slit lamp microscope was used to detect the number of corneal neovascularization in the two groups of rabbits. Results The total effective rate of the observation group was higher than that of the control group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The corneal inflammation score and corneal ulcer score in two groups were significantly decreased after treatment（P<0.05）. The corneal inflammation score and corneal ulcer score after treatment in the observation group were lower than those in the control group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. After treatment， VEGF and NO in two groups decreased significantly， and PEDF increased significantly（P<0.05）. VEGF and NO in the observation group after treatment were lower than those of the control group， and the PEDF in the observation group after treatment was higher than the control group， the difference was statistically significant（P<0.05）. The wound healing time and the number of new blood vessels in the observation group was lower than that in the control group（P<0.05）. Conclusion Breviscapine injection can significantly improve the efficacy of corneal alkali burn and regulate vascular endothelial function in rabbits.

[Key words] Breviscapine injection；Corneal alkali burn；Vascular endothelial function

碱性物质刺激眼部，能迅速溶解眼部蛋白质和脂肪，破坏组织结构，还能渗透进入眼内，引起眼部组织细胞坏死[1]。随着现代经济建设的不断发展，角膜碱烧伤的发病率呈上升趋势，严重危及人的身心健康。目前西医治疗角膜碱烧伤以常规对症治疗为主，虽能改善人的临床症状，但角膜创面修复较为缓慢，临床疗效不尽理想。近年来，中医药在眼科病变的治療中取得了较好的疗效，逐渐受到广大医师的关注[2]。灯盏花素注射液是由灯盏花中提取的有效成分制成的复方制剂，具有抗血凝、扩张血管的功效，还能显著改善血管内皮功能[3]。本研究对角膜碱烧伤兔在常规对症治疗的基础上，采用灯盏花素注射液治疗，探讨其治疗效果。为进一步在临床眼科中应用提供实验依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

经相关部门动物伦理委员会审查同意后（实验动物使用许可证号：SYXK（浙）2014-0006），购买清洁级健康日本大耳白兔40只，雌雄不分，体重 2.0～2.5 kg，均排除眼疾，以右眼为实验眼。

1.2 兔碱烧伤动物模型制备

将浸有1.0 mol/L NaOH溶液的环行滤纸（外径12 mm，内径6 mm）覆盖于健康日本大耳白兔右眼角膜缘约30 s，接着用生理盐水冲洗30 s，刮除角膜中央上皮。结膜膜囊滴抗生素滴眼液，每日4次。1 d、3 d、1周、2周及1个月时裂隙灯检查，观察角膜溃疡、荧光素染色、新生血管及混浊情况并评分。

1.3 动物分组

碱烧伤动物模型制备6周后，将40只日本大耳白兔随机分为对照组和观察组，每组20只。两组兔龄、体重、烧伤分级比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.4 治疗方法

对照组：采用常规对症治疗，右眼采用局部滴眼液抗菌抗炎，阿托品散瞳。耳缘静脉注射与观察组灯盏花素注射液相当量的生理盐水。观察组：在对照组基础上，采用灯盏花素注射液按照2.5 mg/kg耳缘静脉注射。静脉滴注灯盏花素注射液（石药银湖制药有限公司，规格为20 mg：5 mL，生产批号：20170821），每日1次。两组均于治疗4周后统计疗效。

1.5 疗效标准[4]

①治愈：烧伤创面全部愈合，角膜面恢复正常，无功能障碍；②有效：烧伤创面疾病愈合，角膜面粗糙不平，功能或色泽未完全恢复；③无效：烧伤创面炎症反应剧烈，有明显瘢痕，眼部功能受到影响。总有效率=治愈率+有效率。

1.6 观察指标

采用Ando计分法评估兔的角膜炎症状态：①角膜透明，无混浊，计为0分；②虹膜可见纹理，角膜轻度混浊，计为1分；③虹膜纹理不清晰，角膜中度混浊，计为2分；④瞳孔隐见，角膜中度混浊，计为3分；⑤瞳孔不见，角膜重度混浊，计为4分。

采用Trousdale计分法评估兔的角膜溃疡状态：①角膜无染色，计为0分；②角膜染色面积≤1/4象限，计为1分；③角膜染色面积>1/4象限，但≤1/2象限，计为2分；④角膜染色面积>1/2象限，但≤3/4象限，计为3分；⑤角膜染色面积>3/4象限，计为4分。

于治疗前后，采集兔耳缘静脉血4 mL，采用放射免疫法检测血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）、一氧化氮（nitric oxide，NO）的水平。记录两组的创面愈合时间，运用裂隙灯显微镜检测两组兔的角膜新生血管数量。

1.7 统计学方法

选取统计学软件SPSS19.0处理全部数据，疗效等计数资料采用百分率表示，组间对比行χ2检验，评分、理化指标、血管数量等计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间对比采用独立t检验，组内对比采用配对t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的疗效比较

观察组的总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 两组的角膜炎症评分、角膜溃疡评分比较

两组治疗前角膜炎症评分、角膜溃疡评分比较无明显差异（P>0.05）；两组治疗后角膜炎症评分、角膜溃疡评分明显降低（P<0.05）；观察组治疗后的角膜炎症评分、角膜溃疡评分低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.3两组的血管内皮功能指标比较

两组治疗前VEGF、PEDF、NO无明显差异（P>0.05）；两组治疗后VEGF、NO明显降低，PEDF明显升高（P<0.05）；观察组治疗后VEGF、NO低于对照组，PEDF高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.4 两组的创面愈合时间和新生血管数量比较

观察组的创面愈合时间和新生血管数量低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

角膜碱烧伤的主要病理机制包括角膜或结膜内大量的微血管栓塞或痉挛，引起局部组织严重缺血性坏死，出现水肿等症状；同时受损的组织细胞发生炎症级联反应，大量的炎症细胞浸润角膜组织，改变细胞膜通透性，产生大量的炎症因子及氧化自由基，造成角膜组织继发性损伤；还能释放大量的胶原酶影响角膜增生；多种病理反应刺激VEGF表达，促进血管内皮细胞过度有丝分裂，促进新生血管形成[5-6]。西医治疗以常规对症治疗为主，糖皮质激素能抑制非特异性炎症反应，减轻局部组织的损伤，维生素C能促进组织细胞间质和胶原蛋白的分泌，抗菌抗炎能预防局部组织感染[7]。

灯盏花素是中药灯盏花的主要提取物，其有效成分包括黄酮类物质、倍半萜、咖啡酸酯等多种活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗纤维化、抗血小板聚集、扩张血管、促进纤溶酶原活性、改善视神经轴浆运输等多种生物学功能[8]。近年来灯盏花素注射液广泛用于青光眼、视网膜病变的治疗，并取得了良好的疗效[9-10]。本研究结果显示，观察组的总有效率高于对照组。观察组治疗的角膜炎症评分、角膜溃疡评分低于对照组。结果提示，灯盏花素注射液能进一步提高角膜碱烧伤的临床疗效，改善兔的临床症状。灯盏花素注射液治疗角膜碱烧伤的作用机制可能为改善局部微循环，显著改善缺血缺氧的症状，促进组织间能量及物质交换，减轻组织水肿症状，还能通过抗炎、抗氧化的作用，减轻角膜组织细胞的损伤，有助于创面的愈合[11-12]。

角膜本身为完全透明无血管的组织，当角膜受到感染、免疫排斥、外伤等作用后会刺激血管向角膜内生长，形成角膜新生血管，严重影响兔的视力及角膜的组织结构[13]。角膜碱烧伤重要的治疗组成部分为抑制角膜新生血管形成。有研究结果表明，角膜新生血管的形成与血管内皮功能关系密切[14]。VEGF、PEDF、NO是参与新生血管的生长的重要细胞因子。VEGF是目前发现的促进血管生长作用最强的高度特异性细胞因子，能促进血管内皮细胞有丝分裂、迁移、增殖，增强血管的通透性，促进血管的形成[15]。VEGF是角膜新生血管的重要诱导因素[16]。NO是种强力的血管舒张因子，其作用机制为NO与血管平滑肌中铁原子结合，激活环磷酸鸟苷依赖的PKG的活性，促进钙离子外流或在胞内存储，促进平滑肌舒张，NO还能促进血管内皮细胞生长，维持血管结构的完整性，参与角膜新生血管的形成[17]。VEGF的表达与NO水平呈正相关，VEGF可促进内皮细胞合成NO，NO能作用于内皮细胞的蛋白酶，促进VEGF的表达[18]。PEDF是调节血管生长的作用因子，能促进活化的血管内皮细胞凋亡，抑制缺氧诱发的新生血管信号，抑制角膜新生血管的形成[19-20]。本研究结果发现，观察组新生血管数量低于对照组。观察组治疗后VEGF、NO低于对照组，PEDF高于对照组。结果提示，灯盏花素注射液可抑制角膜碱烧伤兔角膜新生血管的形成，其可能的机制之一为灯盏花素可调节血管内皮细胞功能，抑制VEGF、NO的表达，促进PEDF的表达，发挥抑制血管形成的作用。

综上所述，本实验初步观察了灯盏花素注射液对兔角膜碱烧伤的较好疗效，并通过VEGF、PEDF、NO的检测探讨了其可能的机制，为临床进一步在人类角膜碱烧伤中的应用提供动物实验依据。

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（收稿日期：2018-05-16）