靳双星,张桂枝,张 潇,王学强

(1.河南牧业经济学院动物医学院,河南 郑州 450046;2.河南牧业经济学院动物科技学院,河南 郑州 450046;3.开封市动物疫病预防控制中心,河南 开封 475000)

中药因其具有安全、高效、低毒、价廉、不易产生耐药性等优点,在动物疫病防控中发挥着越来越大的作用。炮制中药的工艺是中药制药的精髓。近年来,通过微生物发酵手段炮制中药的研究越来越受到重视,并取得了一定进展[1-2]。与未发酵中药相比,发酵中药可较大幅度地改变药性,提高疗效,降低毒副作用,扩大适应症,是现代生物技术和中药研究的完美结合,为中药的发展开辟了广阔新空间,成为中药研究与开发的新热点[3]。因此,本课题组根据中兽医理论及养殖生产实践研制出补中益气汤发酵制剂。为探讨其对肉鸡生长性能和免疫功能的影响,在饲料中添加不同剂量的补中益气汤发酵制剂,测定艾拔益加(AA)肉鸡的日增重、料肉比、免疫器官指数、新城疫(ND)抗体效价和血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)等指标的变化,为该制剂在生产中应用提供理论依据和技术参考。

1 材料与方法

1.1 试验样品 复方中药是由黄芪、白术、党参、甘草、当归、柴胡、陈皮、升麻等8味中药组成的补中益气汤。发酵方法参考张桂枝的文献[4]。

1.2 日粮组成及试验设计

1.2.1 日粮组成,见表1。

表1 试验动物日粮组成

1.2.2 试验设计 1日龄健康AA肉鸡,隔离饲养至7日龄,选取300只体重相近健康的肉仔鸡,随机分为4组,每组设5个重复,每个重复15只鸡,分笼饲养,自由采食和饮水,试验期间各组饲养管理条件一致。空白对照组,饲喂基础日粮;中药对照组,基础日粮中添加1%未发酵补中益气汤中药;试验1、2组,在饲料中分别添加0.5%、1.0%补中益气汤发酵制剂。免疫程序：4组鸡均在7日龄1.5倍量点眼滴鼻接种新城疫活疫苗(LaSota株);21日龄2.5倍量饮水接种新城疫活疫苗(LaSota株)。

1.3 主要试剂 IgG、IgA、IgM ELISA检测试剂盒(均购自南京建成生物工程研究所),新城疫(ND)标准浓缩抗原、ND标准阳性血清(均购自中国兽医药品监察所),鸡新城疫活疫苗(LaSota株)(购自齐鲁动物保健品有限公司)。

1.4 主要仪器 高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、酶标仪、恒温培养箱、离心机、96孔V型反应板、微量移液器等。

1.5 检测指标及测定方法

1.5.1 平均日增重 每组分别在 7、14、21、28、35日龄早上未饲喂情况下空腹称重,计算平均日增重。平均日增重=(周末平均体重-周初平均体重)/7。

1.5.2 阶段料肉比 鸡群在7日龄开始准确记录喂料量,并且准确称量鸡只体重并记录。阶段料肉比=平均喂料量/(末体重-初体重)。

1.5.3 免疫器官指数测定 于14、21、28、35日龄,每个处理组共选15只鸡,分别称重,颈静脉放血致死,迅速摘取胸腺、脾脏和腔上囊,进行称重并计算其免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重量(g)/试验阶段体重(kg)。

1.5.4 抗体效价测定 分别在14、21、28、35日龄,每个处理组共选15只鸡,采用微量红细胞凝集抑制试验(HI)检测血清中ND抗体,用n log2来表示。

1.5.5 免疫球蛋白浓度测定 按照ELISA试剂盒说明书,测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM浓度。

1.6 统计分析 试验数据用SPSS 20.0统计软件的One-Way ANOVA法进行单因素方差分析,并用Duncan's法进行显著性检验,以P＜0.05作为差异显著性判断标准,试验结果均以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡生长性能的影响

2.1.1 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡平均日增重的影响 由表2可以看出,在14、21、28日龄时各组之间差异均不显著(P＞0.05);35日龄时试验1组的平均日增重与空白对照组相比差异显著(P＜0.05),但与中药对照组和试验2组相比差异不显著(P＞0.05)。

2.1.2 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡阶段料肉比的的影响 由表3可知,14、21日龄时各组之间差异均不显著(P＞0.05),28、35日龄时试验1组料肉比与空白对照组和中药对照组之间差异显著(P＜0.05);但与试验2组相比差异不显著(P＞0.05)。

2.2 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡免疫器官指数的影响 由表4可以看出,14日龄时各组之间免疫器官指数无显著差异(P＞0.05);21日龄时中药对照组、试验1组和2组胸腺指数明显增高,与空白对照组相比差异显著(P＜0.05);28、35日龄时试验1组所有的免疫器官指数均显著高于空白对照组和中药对照组(P＜0.05);28日龄,试验1组与试验2组免疫器官指数差异不显著(P＞0.05),35日龄试验1组腔上囊指数显著高于试验2组(P＜0.05)。

表2 补中益气汤发酵制剂对肉鸡平均日增重的影响 (gd-)

表3 补中益气汤发酵制剂对肉鸡料肉比的影响

表4 补中益气汤发酵制剂对肉鸡免疫器官指数的影响

2.3 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡ND抗体效价的影响 由表5可知,14、21日龄时各组之间ND抗体效价无明显差异(P＞0.05)。28日龄和35日龄时,中药对照组、试验1组和2组的ND抗体效价明显高于空白对照组(P＜0.05),且试验1组和2组明显高于中药对照组(P＜0.05),但试验1组和2组之间无明显差异(P＞0.05)。

2.4 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡血清免疫球蛋白的影响 由表6可以看出,在14日龄时各组IgG、IgA、IgM指标差异均不显著(P＞0.05)。在21日龄时,试验1、2组的IgG浓度明显升高,与空白对照组和中药对照组相比差异显著(P＜0.05);IgA浓度,中药对照组、试验1组和2组显著高于空白对照组(P＜0.05)。28日龄时,IgG和IgA浓度,中药对照组、试验1组和2组显著高于空白对照组(P＜0.05);试验1组IgM浓度显著高于空白对照组和中药对照组(P＜0.05)。35日龄时,IgG浓度,中药对照组、试验1组和2组显著高于空白对照组(P＜0.05),且试验1、2组与中药对照组相比差异显著(P＜0.05);IgA浓度,试验1组明显高于空白对照组和中药对照组(P＜0.05)。

表5 补中益气汤发酵制剂对肉鸡新城疫抗体效价的影响 (n log2)

表6 补中益气汤发酵制剂对AA肉鸡血清免疫球蛋白的影响

3 讨论

现代药理研究显示[5-7],补中益气汤具有调整胃肠运动的作用,能调节胃酸、胃蛋白酶的分泌;能增强小肠对葡萄糖的吸收功能;增加胰液的分泌。本试验研究结果表明,在饲料中添加补中益气汤发酵制剂可显著增加肉鸡的日增重,提高饲料转化率,尤其在试验后期效果较明显。

胸腺、腔上囊和脾脏是禽类重要的免疫器官,免疫脏器指数可在一定程度上反映机体免疫功能的强弱[12]。免疫器官质量和指数增加是由于其器官自身的细胞生长发育和分裂增殖所致,是机体免疫增强的表现。本研究发现,补中益气汤发酵制剂能显著提高AA肉鸡的免疫器官指数,说明中药补中益气汤经过发酵后,可较大幅度地提高药效,降低药物用量,促进肉鸡免疫器官的发育。

体液免疫是机体抵抗传染病的主要因素之一,抗体是介导体液免疫的重要分子,抗体效价的高低直接反映机体的体液免疫状态[9]。本试验结果表明,28、35日龄时试验1组的ND抗体效价明显高于空白对照组和中药对照组。说明中药经过发酵后免疫增强效果提高,这与安胜英等[10]、张桂枝等[4]试验结果相一致。

免疫球蛋白是介导体液免疫的主要抗体,在一定程度上反映机体对疾病的抵抗能力[11],其含量升高,说明机体体液免疫功能增强。通过各种方式被动获得的各种免疫球蛋白具有抗菌、抗外毒素或抗病毒的免疫功能[12]。本研究结果表明,AA肉鸡饲料中添加补中益气汤发酵制剂能显著提高IgG、IgA和IgM浓度,增强肉鸡的体液免疫功能。

韩春杨等[13]研究表明,微生物发酵中药是一种新的中药炮制方法,通过微生物的降解作用,最大限度地提取药物的有效成分和活性物质,并生成新的药物成分,这可能是中药发酵后药效增强的主要机制。朱新术[14]研究表明,利用筛选的某乳酸菌株发酵黄芪后,微生物与中药之间产生了协同效果。微生物与中药之间存在协同效应[15]或者是中药与益生菌双重叠加,调节胃肠菌群平衡,发挥促生长和免疫调节作用,有可能是发酵中药发挥药效的作用机理之一。本研究结果显示,补中益气汤经过发酵后效果明显增强,可能是由于通过发酵有效成分以及含量发生了某些改变所致,具体有效成分发生何种改变,有待后续研究。