李 甜，覃 英，胡 渝（重庆市人民医院400014）

乙型肝炎病毒（HBV）感染呈全球分布趋势，是世界性公共卫生疾病之一，也是危害中国公共卫生健康的疾病重要之一[1]。本研究中，通过对重庆市HBV病毒情况进行群体遗传学分析，探讨重庆地区HBV病毒的群体遗传多样性，进一步判断重庆市HBV群体扩张趋势，最终预测重庆地区HBV病毒爆发的风险。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择重庆市范围内8个不同的区（黔江区、万州区、南川区、涪陵区、北碚区、垫江县、合川区和沙坪坝区），收集HBV感染患者的血清，患者入院时间为2014年1—12月，患者户籍为重庆且长期居住在重庆，排除标准为患有其他类型肝炎。血清分离后使用干冰运输，保存在−80℃冰箱。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 使用E−CyclerTM 96聚合酶链反应（PCR）扩增仪（北京博奥生物有限公司）。由上海PerkinElmer提供磁珠法提取HBV DNA试剂盒。德国Qiagen公司提供PCR扩增试剂。华大基因提供PCR引物（10µmol/L），引物序列如下：5′−GCGGGGTTTTTCTTGTTGA−3′，5−GGGACTCAAGATGTTGTACAG−3′。

1.2.2 研究方法

1.2.2.1 标本处理及检测 使用上海铂金埃尔默生物科技有限公司试剂盒（磁珠法）进行提取。PCR扩增条件为：95℃ 预变性10 min；95℃变性30 s，52℃复性45 s，72℃延伸90 s，共40个循环；72℃延伸10 min。PCR扩增产物由华大基因测序。

1.2.2.2 HBV 群体遗传学分析 使用MEGA6.0软件计算碱基组成、保守及变异碱基位点等[2]。使用DNAspv5.0软件[3]计算单倍型多肽性（h）、单倍型数量（hap）和核苷酸多肽性（p）。使用软件DNAspv5.0计算Fu's Fs值及Tajima's D值，并构建错配分布。若HBV有效种群保持稳定，则核酸的错配分布曲线呈现出多峰曲线分布，同时Fu's Fs和Tajima D值检验不显著。若群体经历过扩张，则核酸的错配分布曲线呈单峰倒钟形分布[4]，Fu's Fs中性检验和Tajima D值同时偏离中性突变。……