任凯旋 涂岳圣 朱涛 骆万婷 林家衍 叶焕荣 方俊杰

(1.南方医科大学临床医学五年制，广东 广州 510280；2.南方医科大学珠江医院呼吸内科，广东 广州 510280)

炎症是机体对损伤产生的一种保护性反应，但过度的炎症反应也可直接导致组织细胞的损伤和死亡，抗炎治疗目前已经成为慢性炎性疾病的主要治疗手段，如对动脉粥样硬化、类风湿关节炎、哮喘、脓毒血症、急性呼吸窘迫综合征和急性胰腺炎等[1-5]。大黄素是大黄的主要药理成分，研究发现大黄素对多种炎症性疾病如急性胰腺炎、动脉粥样硬化及哮喘有良好的治疗效果[6-7]。有实验证明大黄素对炎症的调控作用主要与阻断NF-κB的活化密切相关[7-8]。同时有研究显示PPARγ信号通路可能参与了大黄素对NF-κB活化的调控作用，但具体的关系尚未明确[8-9]。因此，本研究旨在探究大黄素对LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的调控作用及其相关信号通路，现将结果报告如下。

1 材料和方法

1.1 主要试剂和材料 RAW264.7细胞购自中国典型培养物保存中心；大黄素及LPS购自Sigma Chemical公司；siRNA-PPARγ (sc-29455) 和siRNA-scrambled (sc-37007)购自美国Santa Cruz Biotechnology公司；β-actin、ICAM-1抗体、MCP-1抗体、PPARγ抗体、NF-κB p65及磷酸化NF-κB p65抗体购自美国Santa Cruz Biotechnology公司；超纯水。其余试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 将RAW264.7细胞培养于添加青霉素(100 IU/mL)、链霉素(100 μg/mL)以及10%热灭活胎牛血清的培养基中，置于37°C、95%空气、5% CO2孵箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。取细胞置于96孔板上，密度为每孔2×103个细胞。预先用大黄素(25 μM)干预RAW264.7细胞。使用siRNA转染RAW264.7细胞。干预4h后加入LPS (100 ng/mL)。6h后使用MTT比色法检测细胞活性[10]。提取蛋白和mRNA，同时收集培养液上清保存于-80°C用于ELISA。……