王 璇，吴玙彤，潘淑惠，文正常

（贵州省畜牧兽医研究所，贵州 贵阳 550005）

猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV)）是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。Cartwright等1967年首次证实了它的致病性[1]。我国候世宽、潘雪珠等分别在黑龙江、上海、四川等地分离出PPV，证明本病在我国存在[2-5]。近年来，由于猪只流通频繁，北京、广西、宁夏及周边地区、河南等地都有猪细小病毒感染报道。

2016年9月，贵州某猪场的139头初产母猪开始产仔，所产的仔猪中有60%发生木乃伊化，30%系死胎。2016年10月，又有28头初产母猪产仔，除去部分木乃伊和死胎以外，共产下274头弱仔，大多数弱仔在产后2～3周内死亡，仅34头仔猪存活，存活率只有12．41%。笔者等根据病毒的分离与鉴定，确诊为猪细小病毒感染所致，现将实验室诊断过程报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

3头流产胎儿，采集自贵州某猪场。

1.1.2 细胞

PK-15传代细胞，购自中国兽医药品监察所。

1.1.3 试剂

SDS、蛋白酶K、酚/氯仿/异戊 醇、dNTPs、Taq DNA聚 合 酶、D2000 DNA Marker、RNase等 试 剂，购自上海生物工程技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 病料处理

取种猪场B261、B262、B38初产母猪流产胎儿的肝脏病料，混合后以1∶5的比例加入生理盐水研磨组织匀浆液，青霉素、链霉素双抗处理过夜，反复冻融3次，4 ℃ 10 000 r/min离心10 min除去组织碎片，取上清液作无菌检查合格后－20 ℃保存备用。

1.2.2 病毒分离培养

采用0．25%胰酶消化分散PK-15单层细胞后，待细胞长满细胞瓶的1/3时，贴壁倾倒瓶内营养液，加入已处理好的病料9 mL。37 ℃吸附1 h（每隔15 min摇一次）后，加入等量的维持液。37 ℃培养3～7 d，待出现细胞病变后，收冻。如3～7 d后还未出现病变，再盲传3代，若无病变则弃之。同时设正常对照细胞。……