陈 宁，郝 军，朱桂云，安晓颖，孙精晶，欧阳琴，杨永辉

(1. 河北省胸科医院病理科，河北 石家庄 050041；2. 河北医科大学病理学教研室，河北 石家庄 050017)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病最严重的并发症之一，最终引起终末期肾衰竭(end-stage renal disease, ESRD)[1-2]。目前，针对DN的治疗仍以预防为主，临床上尚未研发出治疗DN尤其是抗肾间质纤维化的有效药物。因此，研究DN肾间质纤维化特别是细胞外基质(extracellular matrix, ECM)沉积的发生机制，并寻找潜在的干预靶点，将对DN的防治起到关键作用。硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4, THEM4)是一种Akt内源性抑制因子[3]。本研究前期从细胞水平上发现重组质粒pYr-ads-4-THEM4的转染能够逆转高糖诱导的人肾小管上皮细胞phospho-Akt(Ser 473)的活化以及胶原的分泌。然而，过表达THEM4能否减轻糖尿病小鼠肾脏ECM沉积还有待进一步证实。因此，本研究通过尾静脉注射将pYr-ads-4-THEM4表达质粒转染至糖尿病小鼠体内，进一步观察THEM4在糖尿病小鼠肾脏中的表达及其对ECM沉积的影响。

1 材料与方法

1.1试剂pYr-ads-4-THEM4 vector、pYr-adshuttle-4 empty vector均购自长沙赢润生物有限公司；TransIT-EE Hydrodynamic Delivery Solution购自美国Mirus公司；兔抗THEM4单克隆抗体(14692-1-AP)、兔抗β-actin单克隆抗体(20536-1-AP)、兔抗α-SMA单克隆抗体(14295-1-AP)、兔抗纤维黏连蛋白(fibronectin, FN)单克隆抗体(13548-1-AP)、兔抗Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ, Col Ⅲ)单克隆抗体，均购自美国Protein Tech公司；兔抗phospho-Akt (Ser 473)单克隆抗体(#4060)、兔抗Akt单克隆抗体(#4685)，均购自美国Cell Signaling公司；兔抗TGF-β1单克隆抗体(#AP12348a) 购自ABGENT。

1.2动物模型及分组体质量20～25 g健康♂CD1小鼠40只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供(合格证编号0126327)。将实验动物随机分为正常对照组(Control组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+THEM4质粒组(DM+THEM4)、糖尿病+空质粒组(DM+V)，每组10只。后3组小鼠腹腔注射链脲……